目前,有許多方法可用于檢測(cè)食品中的蘇丹紅類染料。其中,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)快捷、靈敏,易于推廣使用。但已報(bào)道的ELISA法最多檢測(cè)其中3種,且只針對(duì)辣椒和番茄產(chǎn)品。本研究在國內(nèi)外首次以對(duì)位紅為分子模板制備抗體,建立了一種多殘留的間接競(jìng)爭ELISA法,同時(shí)檢測(cè)雞蛋中6種蘇丹紅類染料,且與高效液相色譜法的檢測(cè)結(jié)果相當(dāng)。因此,該ELISA法準(zhǔn)確、簡便,能用于禽蛋中蘇丹紅類染料的日常監(jiān)測(cè)。
蘇丹紅類染料(蘇丹紅1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)、蘇丹紅G、對(duì)位紅)是一類印染業(yè)中常用的紅色偶氮染料。有研究表明這些染料具有致癌性和遺傳毒性,因此,世界多國均禁止其作為食品著色劑使用。2011年4月中國衛(wèi)生部和農(nóng)業(yè)部聯(lián)合發(fā)布的《食品中可能違法添加的47種非食用物質(zhì)名單》中,蘇丹紅類染料位居第二。但由于其有較強(qiáng)的著色能力,許多食品加工企業(yè)仍將這些染料非法作為食品著色劑使用,以謀取更高的收益,于是便有了“紅心蛋”。 為保障消費(fèi)者健康,必須要對(duì)食品中殘留的此類染料進(jìn)行嚴(yán)格的檢測(cè)和監(jiān)控。
到目前為止,有許多研究者采用高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)食品中的蘇丹紅類染料進(jìn)行檢測(cè)。在眾多方法中,ELISA法靈敏、快捷,一次檢測(cè)樣品量大,是目前獸藥殘留檢測(cè)中最常用的篩選方法。目前,已報(bào)道的ELISA方法均是采用蘇丹紅1號(hào)或蘇丹紅1號(hào)的衍生物為半抗原,所得抗體最多只能識(shí)別3種蘇丹紅染料。因此,這樣的ELISA法在實(shí)際檢測(cè)時(shí)容易出現(xiàn)漏檢。另外,這些ELISA方法只用來對(duì)番茄和辣椒產(chǎn)品進(jìn)行了檢測(cè),沒有對(duì)雞蛋進(jìn)行檢測(cè)。那么建立一種能同時(shí)檢測(cè)雞蛋中這6種紅色染料的方法就十分必要。
本項(xiàng)研究以對(duì)位紅為分子模板,將其分子中的硝基還原為氨基,利用氨基的性質(zhì)采用兩種方法分別與載體蛋白偶聯(lián),制備了完全抗原用于免疫新西蘭白兔。在國內(nèi)外首次制備了能同時(shí)識(shí)別上述6種紅色染料的廣譜特異性抗體,交叉反應(yīng)率在26%-108%之間。然后通過對(duì)不同包被抗原和不同抗體組合進(jìn)行了優(yōu)化,在國內(nèi)外首次建了一種多殘留的間接競(jìng)爭ELISA方法檢測(cè)雞蛋中的6種紅色染料,檢測(cè)限范圍為0.2-0.6ng/g。在空白雞蛋中按2-20ng/g的濃度分別添加6種染料,添加回收率范圍為77.2%-96.0%,變異系數(shù)小于10.3%,說明本方法準(zhǔn)確度高,精密度高。同時(shí),建立了一種高效液相色譜法對(duì)該ELISA方法進(jìn)行了驗(yàn)證。通過對(duì)50枚未知雞蛋進(jìn)行檢測(cè),表明該ELISA法與高效液相色譜法的檢測(cè)結(jié)果相當(dāng)。
本研究建立的酶免疫分析方法快速、簡便、靈敏、成本低,可用于禽蛋中蘇丹紅類染料的日常監(jiān)測(cè)。并且,應(yīng)用本項(xiàng)目研究的技術(shù)方法還可進(jìn)一步制備單克隆抗體,研發(fā)商品化試劑盒或試紙條,能在更大范圍內(nèi)對(duì)禽蛋產(chǎn)品進(jìn)行監(jiān)測(cè),同時(shí)也可用于辣椒油、辣椒粉等食品的檢測(cè),具有非常廣泛的應(yīng)用前景和實(shí)用價(jià)值。
第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品 三等獎(jiǎng)
該作品的論文《Multi-determination of Para Red and Sudan dyes in egg by a broad-specific antibody based enzyme linked immunosorbent assay》已在SCI索引期刊《FOOD CONTROL》上發(fā)表(Food Control, 2011, 22, 1770-1775)。該作品在2011年5月28-29日河北省秦皇島市舉行的“挑戰(zhàn)杯”2011河北省大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽中獲得特等獎(jiǎng)。