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本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目以纖溶酶活力為指標(biāo)，通過搖瓶培養(yǎng)方式對蛹蟲草的液體發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化處理，確定最佳發(fā)酵條件，按擬確定的最佳發(fā)酵條件在發(fā)酵罐中進(jìn)行比擬放大，利用層析法對蛹蟲草發(fā)酵液進(jìn)行分離提純，確定最佳分離路線。

對蛹蟲草液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)生纖溶酶的培養(yǎng)基和發(fā)酵控制參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，通過分析得到液體發(fā)酵產(chǎn)纖溶酶的最佳工藝條件為：蔗糖2%、豆餅5%；250mL三角瓶裝液量50mL；發(fā)酵時間為5天；蔗糖/豆餅比為2：5；發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為自然（約6-7之間）；發(fā)酵培養(yǎng)接菌量為直徑為1cm的菌片1片；最適培養(yǎng)溫度為21-25℃。在10L發(fā)酵罐中的放大結(jié)果顯示，在攪拌轉(zhuǎn)速和通風(fēng)量為100r/min，600L/h的條件下纖溶酶的溶圈面積可達(dá)214.28mm2，相當(dāng)于尿激酶286.21U/mL，較搖瓶條件下的酶活力提高了3.2倍。蛹蟲草通過深層發(fā)酵產(chǎn)生的纖溶酶經(jīng)過硫酸銨鹽析、Octyl Sepharose FF疏水作用層析、Superdex 75 凝膠過濾層析進(jìn)行分離純化。樣品經(jīng)Octyl Sepharose FF疏水作用層分離得到兩個活性組分，本實(shí)驗(yàn)收集活性組分II進(jìn)一步純化，最終纖溶酶活性組分II達(dá)到了電泳純。提純后的蛹蟲草纖溶酶II比活力達(dá)到2197.66 U/mg，活力回收率為7.85%，純化了68.82倍。

第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品 三等獎
無