河南中醫(yī)學(xué)院專區(qū)
基本信息
- 作品名稱：
- 產(chǎn)綠原酸金銀花內(nèi)生菌的分離研究
- 大類：
- 自然科學(xué)類學(xué)術(shù)論文
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
金銀花為河南重要的地道藥材，本作品以金銀花為實驗材料，對其根、莖、葉、花不同組織器官的內(nèi)生菌進行分離、純化；通過TLC、HPLC等方法對篩選出的內(nèi)生菌次生代謝產(chǎn)物進行分析，篩選出3株產(chǎn)綠原酸的菌株，對其進行形態(tài)學(xué)鑒定，對篩選的高產(chǎn)綠原酸菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化選擇，并對菌株發(fā)酵液進行抑菌學(xué)實驗。為金銀花活性成分-綠原酸的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
- 詳細介紹：
選取健康金銀花植株的不同組織部位(新鮮根、莖、葉、花)作為內(nèi)生菌分離實驗材料，用平板劃線法，點植法進行分離。實驗過程中設(shè)有對照：吸取少量表面消毒中最后一次沖洗材料的無菌水，涂布于培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)如無微生物長出，表明表面消毒徹底，分離到的是內(nèi)生菌。經(jīng)過反復(fù)分離、篩選、純化出了107株內(nèi)生菌，其后用菌落觀察和鏡檢的方法去除重復(fù)，最終得到86株內(nèi)生菌。對86株內(nèi)生菌進行發(fā)酵后，用TLC法進行檢測，結(jié)果顯示次生代謝產(chǎn)物與綠原酸比移值相同的菌株有三株。為了確定這些次生代謝產(chǎn)物是否是含綠原酸，本次實驗研究進一步用HPLC法對其進行檢查，檢測結(jié)果與TLC法結(jié)果一致。其后以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌為指示菌，通過瓊脂擴散法對菌株抑菌活性進行研究，實驗結(jié)果得出，菌株對金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌具有較強的抑菌活性，抑菌效果與金銀花藥材基本相同，而對大腸桿菌則表現(xiàn)出較弱的抑菌活性。利用形態(tài)比較法對菌落、菌絲體、孢子形態(tài)特征的認真觀察分析，鑒定3株產(chǎn)綠原酸菌株，分別為毛霉屬、曲霉屬、青霉屬。為了提高內(nèi)生菌產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物的效率，對內(nèi)生菌二次發(fā)酵的培養(yǎng)條件進行優(yōu)化即：碳源、氮源以及培養(yǎng)溫度進一步做了考察，最終確定最適培養(yǎng)條件為：發(fā)酵培養(yǎng)基為PDB培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為28℃，120r/min，震蕩培養(yǎng)72小時。
- 獲獎情況：
第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品 三等獎
2011年河南省第九屆“挑戰(zhàn)杯”大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品省級競賽特等獎；2011年河南中醫(yī)學(xué)院第四屆“挑戰(zhàn)杯”大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品校級競賽二等獎
