目的:研究新型抗病毒肽-豬瘟病毒p14肽對豬瘟病毒的抗性研究。方法:通過SOE PCR法擴增目的基因,基因片段克隆至pET32a(+)質(zhì)粒中,構(gòu)建重組原核表達系統(tǒng),表達出的原核蛋白純化后,采用實時定量PCR法和間接免疫熒光法對4種黃科病毒的進行抗性研究。同時將TAT轉(zhuǎn)導(dǎo)域同p14肽相結(jié)合。結(jié)果:通過兩種方法的對比,豬瘟病毒p14肽抗豬瘟病毒效果最明顯,TAT-p14串聯(lián)肽抗病毒效果更強。
黃病毒科病是一種重要的引起嚴重疾病的動物傳染病病原體,調(diào)查表明黃病毒科病毒存在一段保守蛋白:p14蛋白。這種蛋白表現(xiàn)出很強的抗病毒活性,也是一種發(fā)展?jié)摿薮蟮目共《镜闹委熕幬?。在本項目中,我們主要研究作為豬瘟病毒NS3解旋酶抑制劑的p14蛋白對豬瘟病毒的抑制作用。我們首先鑒定了p14蛋白的抗病毒活性,然后將p14蛋白同HIV-1 TAT蛋白串聯(lián)結(jié)合,有利于蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)進入細胞。p14蛋白在體外實驗中表現(xiàn)出很高的抗病毒活性,我們就此猜測串聯(lián)多肽在p14蛋白的基礎(chǔ)上活性會有所提高。因此,在本項目中,我們首次將p14蛋白應(yīng)用于抗豬瘟病毒的活性研究,結(jié)果證實p14蛋白的確對豬瘟病毒具有良好的抗性。在此基礎(chǔ)上,我們又將p14蛋白同TAT轉(zhuǎn)導(dǎo)域相結(jié)合,研究串聯(lián)多肽的抗病毒性。結(jié)果證實,串聯(lián)多肽比單一的p14蛋白活性有一定的提高。
第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品 二等獎
1.本項目立項于2009年,為我省大學(xué)生科技創(chuàng)新項目,2010年結(jié)題。編號為DFCS200902。
2.在《中國生物制品學(xué)》雜志上發(fā)表論文《HIV-Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域的研究進展》。
3.核心內(nèi)容已投SCI雜志《Journal of veterinary medical science》。