以玉米螟幼蟲期基因OfSP為模板,合成dsRNA(dsOfSP)。以50ng/μl、1μl/頭,噴灑玉米螟1齡幼蟲,校正死亡率3天52.5%,5天65.6%,10天全部死亡。檢測表明,第5天該基因表達(dá)即被顯著抑制。用同樣濃度和劑量dsOfSP處理棉鈴蟲1齡幼蟲,校正死亡率5天5.1%,10天小于10%,90%個體可完成發(fā)育。
RNA干擾技術(shù)可高效殺死目標(biāo)害蟲,對其他生物影響很小,不存在環(huán)境污染。
以玉米重要害蟲亞洲玉米螟為研究對象,以RNA干擾技術(shù)為依據(jù),探索一種環(huán)境友好的害蟲防治新技術(shù)。
利用高通量的二代測序技術(shù)獲得了亞洲玉米螟幼蟲期特異表達(dá)的基因OfSP的全長cDNA。以該基因為靶標(biāo)合成雙鏈RNA (dsRNA),用熒光標(biāo)記的方法證明了dsRNA可以穿過昆蟲的體壁進(jìn)入體腔。因此,將dsRNA直接噴灑在害蟲體壁上就可以實現(xiàn)相應(yīng)基因的沉默并導(dǎo)致其死亡。
以亞洲玉米螟OfSP基因為模板,體外合成dsRNA(dsOfSP),用50ng/μl的濃度,以1μl/頭的劑量噴灑亞洲玉米螟的1齡幼蟲,3天后的校正死亡率達(dá)到52.54%,5天后的校正死亡率為65.65%,10天后幼蟲全部死亡。定量PCR檢測結(jié)果表明,從第5天開始,該基因的表達(dá)被顯著抑制。
再用同樣的濃度和劑量的dsOfSP處理1齡的棉鈴蟲,處理5天后的校正死亡率為5.12%,處理10天后的校正死亡率不到10%,90%以上的個體均能完成整個發(fā)育周期,并能正常產(chǎn)卵。
上述結(jié)果表明,用某種害蟲特異基因的dsRNA,僅能選擇性地殺死目標(biāo)害蟲,對其他同類害蟲的影響非常小。由于這些基因在人和小鼠中均沒有同源序列,因此,不可能對人和其他生物造成傷害。同時,由于dsRNA比較容易降解成對人和其他生物無害的核苷酸,因此,也不會帶來環(huán)境污染問題。
第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品 二等獎
無