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基本信息
- 項目名稱：
- T載體的高效制備
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取質(zhì)粒是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術(shù)，但提取方法有很多種，且實驗制備不易，目前大多數(shù)實驗室都是向生物技術(shù)公司采購，但價格高、不能滿足現(xiàn)用現(xiàn)制，所以找到一中能夠大量制備T載體的方式、方法對于現(xiàn)如今的實驗室來說非常關(guān)鍵。本實驗的目的意義就在于為實驗室制備成本廉價、使用方便、效率高的T載體。
- 詳細(xì)介紹：
- T載體是一種用于直接克隆PCR產(chǎn)物的新型載體，其分子末端各有一個3’dT(脫氧胸苷)突出，恰好可與PCR產(chǎn)物末端由于taq DNA聚合酶非模板依賴的末端轉(zhuǎn)移酶活性而添加的dA(脫氧腺苷)互補(bǔ)配對，這樣可將PCR產(chǎn)物以粘性末端連接的方式直接克隆到載體上．利用T載體進(jìn)行PCR產(chǎn)物克隆的方法稱為TA克隆。TA克隆是一種快速的，一步到位的克隆法，可以把PCR產(chǎn)物直接插入到質(zhì)粒載體中．這種方式不僅克服了常規(guī)方法的缺點而且操作簡便、方法快捷及連接效率高，應(yīng)用日益廣泛．T載體按照功能可分為克隆型T載體與表達(dá)型T載體，目前市場上供應(yīng)的T載體主要是克隆型T載體，具有克隆目的基因的功能，僅滿足基因保存和測序的需要．若要表達(dá)目的基因，還需要將目的基因重組至表達(dá)載體中。而表達(dá)型T載體具有克隆目的基因和表達(dá)目的基因的功能，還具有其他獨特優(yōu)勢，但其構(gòu)建還存在一些難點。 本實驗旨在于參考眾多的方法，優(yōu)化處一種適合于實驗室制備T載體，簡單，高效，高質(zhì)量的T載體制備方法。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 尋求一種簡單、高效、高質(zhì)量的T載體的高效制備的方法。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨特之處
- T載體的制備方法簡單化，提取效率高，T載體的純度高。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- T載體是實驗室常用的載體之一，需求量大，通過本方法可以為實驗室節(jié)約成本，也可商品化。
學(xué)術(shù)論文摘要
- T載體是直接克隆或表達(dá)PCR產(chǎn)物的載體，重組過程無需酶切和純化，簡便高效。在總結(jié)國內(nèi)外研究的基礎(chǔ)上，概述了構(gòu)建T載體的方法，其中內(nèi)切酶法是T載體制備方法中較先進(jìn)的方式．闡述了T載體在抗體庫構(gòu)建、目的基因克隆、某些蛋白的融合表達(dá)方面的應(yīng)用以及目前T載體的商業(yè)化．對表達(dá)型T載體與克隆型T載體進(jìn)行了比較，其中表達(dá)型T載體可以同時滿足基因克隆和表達(dá)的需要，還具有其他獨特的優(yōu)勢。介紹了表達(dá)型T載體的構(gòu)建難點，探討了今后T載體的研究發(fā)展方向．本實驗的T載體是用E.coli JM109的pblue sriptⅡ質(zhì)粒酶切后加T反應(yīng)得到的，這個質(zhì)粒上帶有具有氨芐抗性的一段基因，所以在做做完轉(zhuǎn)化時可以用氨芐培養(yǎng)基作為第一步的篩選，這也是本實驗的一個創(chuàng)新之處。
獲獎情況
- 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生優(yōu)秀科創(chuàng)論文
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
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同類課題研究水平概述
- 目前來說，T載體應(yīng)用廣泛，但是大多數(shù)實驗室是采用生物技術(shù)公司所研制的產(chǎn)品，以下是一些國內(nèi)的研究境況和專利申請。 2004年06月10日申請的一項發(fā)明公開了一種制備Ｔ載體的方法，其目的是提供一種制備具有較高TA克隆效率的Ｔ載體。此發(fā)明的制備Ｔ載體的方法，包括以下步驟：1)制備含有XcmＩ盒或AhdＩ盒的前Ｔ載體；所述XcmＩ盒包括間隔DNA序列、緊密連接于所述間隔DNA序列兩側(cè)的各一個XcmＩ酶切位點序列，所述AhdＩ盒包括所述間隔DNA序列、緊密連接于所述間隔ＤＮＡ序列兩側(cè)的各一個AhdＩ酶切位點序列；2)用XcmＩ或XcmＩ的同裂酶，或AhdＩ或AhdＩ的同裂酶酶切步驟１）中的前Ｔ載體，得到Ｔ載體；其中，所述步驟1)中的間隔DNA序列為cccdB基因序列。本發(fā)明的制備Ｔ載體的方法將在基因工程領(lǐng)域中發(fā)揮重要作用。
