基本信息
- 項目名稱：
- 黑龍江林蛙（Rana amurensis）消化道5-HT細胞的分布及形態(tài)學觀察
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術(shù)論文
- 簡介：
- 應(yīng)用免疫組織化學方法對黑龍江林蛙消化道內(nèi)的5-HT細胞進行了免疫組織化學的定位研究和形態(tài)學觀察。5-HT 細胞在黑龍江林蛙消化道的各個部位均有分布，其中以胃幽門部分布密度為最高。5-HT細胞的形態(tài)多樣，有圓形、橢圓形、錐體形和梭形等，細胞分布于上皮細胞之間、上皮基部和腺泡上皮細胞之間。
- 詳細介紹：
- 近些年來，隨著免疫組織化學技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用， 不少學者用5-HT 抗血清對不同脊椎動物的消化道 5-HT陽性細胞進行了定位研究，其中兩棲類消化道內(nèi)分泌細胞的研究亦有一些報道，但分歧較大。兩棲動物在整個脊椎動物中居于承上啟下的重要位置，對其消化道內(nèi)分泌細胞進行研究，無疑具有重要的比較內(nèi)分泌學意義。黑龍江林蛙（Rana amurensis）隸屬兩棲綱（Amphibia），無尾目（Anura），蛙科（Ranidae），蛙屬(Rana)，其消化道5-HT 免疫活性細胞的免疫組化研究未見報道。鑒于此，試驗采用卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法，對黑龍江林蛙消化道內(nèi)5-HT免疫活性內(nèi)分泌細胞的分布與形態(tài)學進行了研究，豐富了消化道比較內(nèi)分泌學資料。同時還為進一步研究5-HT對兩棲類消化道功能的影響提供形態(tài)學基礎(chǔ)。 1、研究方法：采用ABC（avidin-biotin-peroxidase complex）免疫組織化學法。 2、技術(shù)路線和實驗方案（免疫組織化學）：常規(guī)石蠟切片脫蠟復(fù)水。滴加正常山羊血清（3:200），室溫（15~25 ℃）孵育20 min，封閉非特異性反應(yīng)部位。傾去血清，滴加一抗，室溫過夜。PBS浸洗3 次×5 min，滴加二抗（羊抗兔IgG 抗血清，稀釋倍數(shù)1:200），孵育45 min，PBS 浸洗3 次×5 min。滴加卵白素-生物素-過氧化物酶（ABC）試劑（稀釋倍數(shù)1:1:100），孵育40 min。PBS 浸洗3 次×5 min，滴加DAB-H2O2顯色后，冷PBS 沖洗，冷蒸餾水、自來水沖洗。蘇木精復(fù)染，常規(guī)石蠟脫水透明，封片。對照切片以ABC試劑藥盒中正常山羊血清代替一抗進行孵育，其余步驟同上。 3、觀察與計數(shù)：在Olympus BH-2型顯微鏡下觀，并對每個部位的切片隨機取10個400倍視野（物鏡40×,目鏡10×）計數(shù)，取平均值（X±SD），表示5-HT細胞的分布密度。用單因素方差分析對同一種內(nèi)分泌細胞在不同部位的平均數(shù)進行統(tǒng)計學處理。應(yīng)用LEICA DC500 DM LB2顯微鏡成像系統(tǒng)拍照。 4、結(jié)果：在光鏡下，黑龍江林蛙消化道各部位均檢測到5-HT細胞，此細胞為棕黑色或深棕色，背景為藍色，反差強很易辨認。對照片呈陰性。 關(guān)于黑龍江林蛙消化道5-HT細胞的比較研究到現(xiàn)在未見報道，對其研究有重要的生物學意義。 （1）進一步豐富消化道比較內(nèi)分泌學資料。 （2）為兩棲類消化生理學的研究提供形態(tài)學基礎(chǔ)。 （3）黑龍江林蛙的消化生理以及人工飼養(yǎng)，擴大飼養(yǎng)規(guī)模提供基礎(chǔ)資料和理論依據(jù)。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 一、目的 對黑龍江林蛙消化道5-HT細胞的分布、分類和形態(tài)進行定位研究，以期為認識其消化機能積累資料，并為消化生理學的研究提供形態(tài)學依據(jù)，進一步豐富比較內(nèi)分泌學資料，同時為林蛙的養(yǎng)殖提供理論參考。 二、基本思路 1、材料：黑龍江林蛙 2、研究方法：免疫組織化學法 3、技術(shù)路線和實驗方案 4、觀察與計數(shù) 5、結(jié)果
科學性、先進性及獨特之處
- 一、科學性及先進性 本實驗室多年來，一直從事兩棲爬行動物學方面的研究工作，主要成員已掌握石蠟切片技術(shù)以及免疫組織化學技術(shù)。 二、獨特之處 1、對黑龍江林蛙的研究，國內(nèi)外僅從生態(tài)分布，形態(tài)學及其養(yǎng)殖等方面有過文獻報道，而對其消化道5-HT細胞的研究國內(nèi)外尚未見報道。 2、首次對黑龍江林蛙消化道內(nèi)分泌細胞進行免疫組化研究。 3、首次探討黑龍江林蛙消化道內(nèi)分泌細胞形態(tài)與功能之間的關(guān)系。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 黑龍江林蛙是食、藥兩用的珍貴蛙種，其營養(yǎng)價值高，因其專攝取昆蟲類食物，又稱“純綠色食品”。此外，制取哈士膜油的副產(chǎn)品如肌肉、內(nèi)臟等均可飼喂家禽、以及珍貴野生家養(yǎng)的毛皮獸；也可加工成混合飼料作為家禽、魚類的飼料.它屬國家保護的有益的或者有重要經(jīng)濟、科學研究價值的陸生野生動物中有很高經(jīng)濟價值的兩棲動物。 關(guān)于黑龍江林蛙消化道5-HT細胞的比較研究到現(xiàn)在未見報道，對其研究有重要的生物學意義。
學術(shù)論文摘要
- 應(yīng)用ABC（avidin-biotin-peroxidase complex）免疫組織化學方法對黑龍江林蛙（Rana amurensis）消化道內(nèi)的5-HT免疫活性細胞（5-Hydroxytryptamine immunoreactive cell，5-HT cell）進行了免疫組織化學的定位研究和形態(tài)學觀察。結(jié)果顯示：5-HT 細胞在黑龍江林蛙消化道的各個部位均有分布，其中以胃幽門部分布密度為最高，胃賁門部次之，空腸部最低。5-HT細胞的形態(tài)多樣，有圓形、橢圓形、錐體形和梭形等，細胞分布于上皮細胞之間、上皮基部和腺泡上皮細胞之間。5-HT細胞形態(tài)與其內(nèi)、外分泌功能是相適應(yīng)的。
獲獎情況
- 已發(fā)表在中國農(nóng)學通報2010年第26卷第14期第94-97頁
鑒定結(jié)果
- 實驗方法先進，數(shù)據(jù)可靠，實驗結(jié)果準確科學。此項研究為消化生理學的研究提供形態(tài)學依據(jù)，進一步豐富比較內(nèi)分泌學資料，同時為林蛙的養(yǎng)殖提供理論參考。
參考文獻
- 一、現(xiàn)有技術(shù) 免疫組織化學技術(shù) 二、檢索目錄 1、黑龍江林蛙 2、消化道 3、5-HT細胞
同類課題研究水平概述
- 迄今為止，國內(nèi)外已有許多學者對脊椎各綱動物消化道中的5-HT內(nèi)分泌細胞進行了免疫組織化學研究。其中關(guān)于魚類，方之平等對鯉魚（Common carp）腸黏膜多種內(nèi)分泌細胞進行了免疫組織化學鑒別和定位，楊青等在黃鱔(Sparus latus)消消化道中檢測到5-HT細胞，葉海輝等對中華烏塘鱧(Bostrichthys sinensis)消化道內(nèi)的多種分內(nèi)泌細胞進行了鑒別與定位。 還有許多學者對爬行動物消化道5-HT細胞也進行了大量的研究。李淑蘭等對虎斑頸槽蛇(Rhabdoph is tigrinus)、變色樹蜥(Calotes versicolor)、黑龍江草蜥(Takydromus amurensis)等消化道5-HT細胞進行了免疫組織化學鑒別和定位，黃徐根等在藍尾石龍子（Eumeces elegans）消化道內(nèi)檢測到5-HT、SS、Gas三種內(nèi)分泌細胞，余中賓等對無蹼壁虎(Gekko swinhonis)等爬行類動物消化道中5-HT細胞進行了研究。 對鳥類報道還較少，Yamada等曾對七種禽類肌胃的內(nèi)分泌細胞進行了系統(tǒng)研究，共檢出了九種消化道激素細胞，但不同的研究者即使對同種禽類的有關(guān)報道亦見較大差異。鄧澤沛等在鵝消化道中檢測到促胃素釋放肽、生長抑素、5-HT和胰多肽四種內(nèi)分泌細胞，李淑蘭等對家鴿（Columba livia domesticus）消化道中5-HT免疫反應(yīng)細胞進行了研究。 對哺乳動物消化道內(nèi)分泌細胞的研究較多，方之平等對犏牛（Pian niu），黃威權(quán)等對大鼠（Rat），李淑蘭等對家兔(Oryctolagus cuniculus)消化道中的5-HT細胞進行了免疫組織化學觀察，楊貴波等對大熊貓（Giant Panda）消化道中的5-HT、生長抑素等10種內(nèi)分泌細胞進行了研究，并對其消化道內(nèi)分泌細胞的分布型也做了研究。 關(guān)于兩棲類消化道5-HT細胞的報道也較多，張盛周等檢測到無斑肥螈(Pachytriton labiatum)、張秋金等檢測到黑斑蛙(Rana nigromaculata)、李淑蘭等檢測到東方鈴蟾(Bombinaorientali)、歐陽鳳等檢測到葉氏隆肛蛙(Paa(Feirana)yei)消化道各段均有5-HT細胞分布。但對于黑龍江林蛙消化道5-HT細胞免疫組織化學定位及比較的研究未見報道。
