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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 黑龍江林蛙（Rana amurensis）消化道5-HT細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)觀察
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)黑龍江林蛙消化道內(nèi)的5-HT細(xì)胞進(jìn)行了免疫組織化學(xué)的定位研究和形態(tài)學(xué)觀察。5-HT 細(xì)胞在黑龍江林蛙消化道的各個(gè)部位均有分布，其中以胃幽門部分布密度為最高。5-HT細(xì)胞的形態(tài)多樣，有圓形、橢圓形、錐體形和梭形等，細(xì)胞分布于上皮細(xì)胞之間、上皮基部和腺泡上皮細(xì)胞之間。
- 詳細(xì)介紹：
- 近些年來(lái)，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用， 不少學(xué)者用5-HT 抗血清對(duì)不同脊椎動(dòng)物的消化道 5-HT陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行了定位研究，其中兩棲類消化道內(nèi)分泌細(xì)胞的研究亦有一些報(bào)道，但分歧較大。兩棲動(dòng)物在整個(gè)脊椎動(dòng)物中居于承上啟下的重要位置，對(duì)其消化道內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行研究，無(wú)疑具有重要的比較內(nèi)分泌學(xué)意義。黑龍江林蛙（Rana amurensis）隸屬兩棲綱（Amphibia），無(wú)尾目（Anura），蛙科（Ranidae），蛙屬(Rana)，其消化道5-HT 免疫活性細(xì)胞的免疫組化研究未見(jiàn)報(bào)道。鑒于此，試驗(yàn)采用卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法，對(duì)黑龍江林蛙消化道內(nèi)5-HT免疫活性內(nèi)分泌細(xì)胞的分布與形態(tài)學(xué)進(jìn)行了研究，豐富了消化道比較內(nèi)分泌學(xué)資料。同時(shí)還為進(jìn)一步研究5-HT對(duì)兩棲類消化道功能的影響提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 1、研究方法：采用ABC（avidin-biotin-peroxidase complex）免疫組織化學(xué)法。 2、技術(shù)路線和實(shí)驗(yàn)方案（免疫組織化學(xué)）：常規(guī)石蠟切片脫蠟復(fù)水。滴加正常山羊血清（3:200），室溫（15~25 ℃）孵育20 min，封閉非特異性反應(yīng)部位。傾去血清，滴加一抗，室溫過(guò)夜。PBS浸洗3 次×5 min，滴加二抗（羊抗兔IgG 抗血清，稀釋倍數(shù)1:200），孵育45 min，PBS 浸洗3 次×5 min。滴加卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶（ABC）試劑（稀釋倍數(shù)1:1:100），孵育40 min。PBS 浸洗3 次×5 min，滴加DAB-H2O2顯色后，冷PBS 沖洗，冷蒸餾水、自來(lái)水沖洗。蘇木精復(fù)染，常規(guī)石蠟脫水透明，封片。對(duì)照切片以ABC試劑藥盒中正常山羊血清代替一抗進(jìn)行孵育，其余步驟同上。 3、觀察與計(jì)數(shù)：在Olympus BH-2型顯微鏡下觀，并對(duì)每個(gè)部位的切片隨機(jī)取10個(gè)400倍視野（物鏡40×,目鏡10×）計(jì)數(shù)，取平均值（X±SD），表示5-HT細(xì)胞的分布密度。用單因素方差分析對(duì)同一種內(nèi)分泌細(xì)胞在不同部位的平均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。應(yīng)用LEICA DC500 DM LB2顯微鏡成像系統(tǒng)拍照。 4、結(jié)果：在光鏡下，黑龍江林蛙消化道各部位均檢測(cè)到5-HT細(xì)胞，此細(xì)胞為棕黑色或深棕色，背景為藍(lán)色，反差強(qiáng)很易辨認(rèn)。對(duì)照片呈陰性。 關(guān)于黑龍江林蛙消化道5-HT細(xì)胞的比較研究到現(xiàn)在未見(jiàn)報(bào)道，對(duì)其研究有重要的生物學(xué)意義。 （1）進(jìn)一步豐富消化道比較內(nèi)分泌學(xué)資料。 （2）為兩棲類消化生理學(xué)的研究提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 （3）黑龍江林蛙的消化生理以及人工飼養(yǎng)，擴(kuò)大飼養(yǎng)規(guī)模提供基礎(chǔ)資料和理論依據(jù)。
作品專業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- 一、目的 對(duì)黑龍江林蛙消化道5-HT細(xì)胞的分布、分類和形態(tài)進(jìn)行定位研究，以期為認(rèn)識(shí)其消化機(jī)能積累資料，并為消化生理學(xué)的研究提供形態(tài)學(xué)依據(jù)，進(jìn)一步豐富比較內(nèi)分泌學(xué)資料，同時(shí)為林蛙的養(yǎng)殖提供理論參考。 二、基本思路 1、材料：黑龍江林蛙 2、研究方法：免疫組織化學(xué)法 3、技術(shù)路線和實(shí)驗(yàn)方案 4、觀察與計(jì)數(shù) 5、結(jié)果
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 一、科學(xué)性及先進(jìn)性 本實(shí)驗(yàn)室多年來(lái)，一直從事兩棲爬行動(dòng)物學(xué)方面的研究工作，主要成員已掌握石蠟切片技術(shù)以及免疫組織化學(xué)技術(shù)。 二、獨(dú)特之處 1、對(duì)黑龍江林蛙的研究，國(guó)內(nèi)外僅從生態(tài)分布，形態(tài)學(xué)及其養(yǎng)殖等方面有過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道，而對(duì)其消化道5-HT細(xì)胞的研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 2、首次對(duì)黑龍江林蛙消化道內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行免疫組化研究。 3、首次探討黑龍江林蛙消化道內(nèi)分泌細(xì)胞形態(tài)與功能之間的關(guān)系。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 黑龍江林蛙是食、藥兩用的珍貴蛙種，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，因其專攝取昆蟲(chóng)類食物，又稱“純綠色食品”。此外，制取哈士膜油的副產(chǎn)品如肌肉、內(nèi)臟等均可飼喂家禽、以及珍貴野生家養(yǎng)的毛皮獸；也可加工成混合飼料作為家禽、魚(yú)類的飼料.它屬國(guó)家保護(hù)的有益的或者有重要經(jīng)濟(jì)、科學(xué)研究?jī)r(jià)值的陸生野生動(dòng)物中有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的兩棲動(dòng)物。 關(guān)于黑龍江林蛙消化道5-HT細(xì)胞的比較研究到現(xiàn)在未見(jiàn)報(bào)道，對(duì)其研究有重要的生物學(xué)意義。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 應(yīng)用ABC（avidin-biotin-peroxidase complex）免疫組織化學(xué)方法對(duì)黑龍江林蛙（Rana amurensis）消化道內(nèi)的5-HT免疫活性細(xì)胞（5-Hydroxytryptamine immunoreactive cell，5-HT cell）進(jìn)行了免疫組織化學(xué)的定位研究和形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果顯示：5-HT 細(xì)胞在黑龍江林蛙消化道的各個(gè)部位均有分布，其中以胃幽門部分布密度為最高，胃賁門部次之，空腸部最低。5-HT細(xì)胞的形態(tài)多樣，有圓形、橢圓形、錐體形和梭形等，細(xì)胞分布于上皮細(xì)胞之間、上皮基部和腺泡上皮細(xì)胞之間。5-HT細(xì)胞形態(tài)與其內(nèi)、外分泌功能是相適應(yīng)的。
獲獎(jiǎng)情況
- 已發(fā)表在中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)2010年第26卷第14期第94-97頁(yè)
鑒定結(jié)果
- 實(shí)驗(yàn)方法先進(jìn)，數(shù)據(jù)可靠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確科學(xué)。此項(xiàng)研究為消化生理學(xué)的研究提供形態(tài)學(xué)依據(jù)，進(jìn)一步豐富比較內(nèi)分泌學(xué)資料，同時(shí)為林蛙的養(yǎng)殖提供理論參考。
參考文獻(xiàn)
- 一、現(xiàn)有技術(shù) 免疫組織化學(xué)技術(shù) 二、檢索目錄 1、黑龍江林蛙 2、消化道 3、5-HT細(xì)胞
同類課題研究水平概述
- 迄今為止，國(guó)內(nèi)外已有許多學(xué)者對(duì)脊椎各綱動(dòng)物消化道中的5-HT內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行了免疫組織化學(xué)研究。其中關(guān)于魚(yú)類，方之平等對(duì)鯉魚(yú)（Common carp）腸黏膜多種內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行了免疫組織化學(xué)鑒別和定位，楊青等在黃鱔(Sparus latus)消消化道中檢測(cè)到5-HT細(xì)胞，葉海輝等對(duì)中華烏塘鱧(Bostrichthys sinensis)消化道內(nèi)的多種分內(nèi)泌細(xì)胞進(jìn)行了鑒別與定位。 還有許多學(xué)者對(duì)爬行動(dòng)物消化道5-HT細(xì)胞也進(jìn)行了大量的研究。李淑蘭等對(duì)虎斑頸槽蛇(Rhabdoph is tigrinus)、變色樹(shù)蜥(Calotes versicolor)、黑龍江草蜥(Takydromus amurensis)等消化道5-HT細(xì)胞進(jìn)行了免疫組織化學(xué)鑒別和定位，黃徐根等在藍(lán)尾石龍子（Eumeces elegans）消化道內(nèi)檢測(cè)到5-HT、SS、Gas三種內(nèi)分泌細(xì)胞，余中賓等對(duì)無(wú)蹼壁虎(Gekko swinhonis)等爬行類動(dòng)物消化道中5-HT細(xì)胞進(jìn)行了研究。 對(duì)鳥(niǎo)類報(bào)道還較少，Yamada等曾對(duì)七種禽類肌胃的內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行了系統(tǒng)研究，共檢出了九種消化道激素細(xì)胞，但不同的研究者即使對(duì)同種禽類的有關(guān)報(bào)道亦見(jiàn)較大差異。鄧澤沛等在鵝消化道中檢測(cè)到促胃素釋放肽、生長(zhǎng)抑素、5-HT和胰多肽四種內(nèi)分泌細(xì)胞，李淑蘭等對(duì)家鴿（Columba livia domesticus）消化道中5-HT免疫反應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行了研究。 對(duì)哺乳動(dòng)物消化道內(nèi)分泌細(xì)胞的研究較多，方之平等對(duì)犏牛（Pian niu），黃威權(quán)等對(duì)大鼠（Rat），李淑蘭等對(duì)家兔(Oryctolagus cuniculus)消化道中的5-HT細(xì)胞進(jìn)行了免疫組織化學(xué)觀察，楊貴波等對(duì)大熊貓（Giant Panda）消化道中的5-HT、生長(zhǎng)抑素等10種內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行了研究，并對(duì)其消化道內(nèi)分泌細(xì)胞的分布型也做了研究。 關(guān)于兩棲類消化道5-HT細(xì)胞的報(bào)道也較多，張盛周等檢測(cè)到無(wú)斑肥螈(Pachytriton labiatum)、張秋金等檢測(cè)到黑斑蛙(Rana nigromaculata)、李淑蘭等檢測(cè)到東方鈴蟾(Bombinaorientali)、歐陽(yáng)鳳等檢測(cè)到葉氏隆肛蛙(Paa(Feirana)yei)消化道各段均有5-HT細(xì)胞分布。但對(duì)于黑龍江林蛙消化道5-HT細(xì)胞免疫組織化學(xué)定位及比較的研究未見(jiàn)報(bào)道。
