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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- KIR2DL1-HLA信號通路在同種異體NK細(xì)胞殺傷KG1A細(xì)胞中的作用研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 本作品主要研究KIR2DL1——HLA信號同路對同種異體NK細(xì)胞殺傷急性髓系白血病細(xì)胞KG1A的影響，比較阻斷前后NK細(xì)胞殺傷活性的變化，從而指導(dǎo)白血病的治療，減少復(fù)發(fā)率。
- 詳細(xì)介紹：
- 急性髓系白血病（AML）是成人白血病的主要類型。AML患者化療或移植后體內(nèi)仍殘存的少量白血病細(xì)胞，成為復(fù)發(fā)根源。 而近年來已由研究證明同種異體NK細(xì)胞輸注治療能有效降低AML患者的復(fù)發(fā)率并提高其生存質(zhì)量，這使同種異體NK細(xì)胞成為了國內(nèi)外近年來研究的熱點(diǎn)。牛新清等在研究同種異體NK細(xì)胞對AML細(xì)胞株KG1A的殺傷活性，并與K562 細(xì)胞株比較時發(fā)現(xiàn)，同一效靶比時，NK對KG1A的殺傷活性均低于K562 ( P<0.05) 。其通過流式細(xì)胞儀檢測得出KG1A細(xì)胞表面存在的主要為KIR2DL1配體，推測KIR2DL1可能為NK表面導(dǎo)致其對KG1A低殺傷的主要抑制性受體，但國內(nèi)尚未有研究進(jìn)行證實(shí)。 本研究通過對比相同效靶比時KIR2DL1單抗封閉前后NK對KG1A的殺傷活性，從而探究KIR2DL1在NK細(xì)胞殺傷KG1A中的作用。進(jìn)一步根據(jù)KIR-HLA錯配原理探究KIR2DL1的錯配是否能夠增強(qiáng)NK對KG1A的殺傷作用，這為選擇供者及增強(qiáng)同種異體NK細(xì)胞抗白血病效應(yīng)、清除微小殘留病提供實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，進(jìn)而更好地發(fā)揮供者淋巴細(xì)胞輸注的療效，為降低AML患者的復(fù)發(fā)率及改善其生存質(zhì)量帶來了曙光。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：研究KIR2DL1-HLA信號通路在同種異體NK細(xì)胞殺傷KG1A細(xì)胞中的作用，為白血病的治療提供新的思路。 基本思路：本研究通過KIR2DL1單抗封閉從健康志愿者外周血單個核細(xì)胞分離純化的NK細(xì)胞，選取LDH測定法比較單抗封閉前后NK細(xì)胞對KG1A細(xì)胞殺傷活性的差異，從而闡明NK細(xì)胞表面受體KIR2DL1與KG1A細(xì)胞表面配體HLA的識別是否為抑制殺傷的主要機(jī)制。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 1、科學(xué)性：KIR是主要的抑制性受體，阻斷殺傷信號的傳遞。檢測KIR2DL1表達(dá)率差異對殺傷活性的影響，對比抗體封閉NK細(xì)胞表面KIR2DL1前后殺傷能力。阻斷該信號通路可增強(qiáng)同種異體反應(yīng)性NK細(xì)胞殺傷能力。 2、先進(jìn)性和獨(dú)特性：首創(chuàng)提出KIR2DL1-HLA通路可能在殺傷抑制性方面起到關(guān)鍵作用。探討不同個體KIR2DL1表達(dá)率差異對殺傷活性的影響。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實(shí)意義
- （1）為AML患者選擇KIR2DL1與HLA信號通路錯配的供者進(jìn)行造血干細(xì)胞移植，將會大大降低移植后微小殘留病的復(fù)發(fā)問題，提高患者五年內(nèi)生存率。 （2）進(jìn)行細(xì)胞輸注治療時加入KIR2DL1阻斷性抗體，從而激發(fā)NK細(xì)胞活性，使其加大殺傷作用。 （3）KIR2DL1-HLA錯配顯著提高殺傷能力。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：探討供者KIR2DL1表達(dá)差異對同種異體NK細(xì)胞殺傷人急性髓系白血病細(xì)胞株KG1A活性的影響，并觀察參與殺傷的活化信號通路。 方法：復(fù)蘇和培養(yǎng)KG1A細(xì)胞。自12例健康供者分離外周血NK細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測KIR2DL1的表達(dá)率，LDH釋放法測定NK細(xì)胞在效靶比20:1時NK細(xì)胞的殺傷活性及anti-KIR2DL1mAb對NK細(xì)胞殺傷活性的影響。 結(jié)果：12例健康供者NK細(xì)胞對KG1A的殺傷活性不同, 個體KIR2DL1 表達(dá)率與NK細(xì)胞對KG1A的殺傷率存在負(fù)相關(guān)。使用抗KIR2DL1單抗封閉受體后NK細(xì)胞對KG1A細(xì)胞的殺傷活性顯著增強(qiáng)。 結(jié)論：NK細(xì)胞對KG1A 細(xì)胞的殺傷分子機(jī)制主要為KIR2DL1 -HLA 信號系統(tǒng)錯配,這有助于臨床造血干細(xì)胞移植時選擇供體和為淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞輸注治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
獲獎情況
- 課題相關(guān)綜述《異基因造血干細(xì)胞移植中異源反應(yīng)性NK細(xì)胞的臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展》（薛同圓、張佳佳、張軒煜、忻勇杰、陸藝綜述，何穎芝審校）： （1）2010年11月6日在廣州市珠江醫(yī)院召開的“2010遺傳上單倍體相合造血干細(xì)胞移植高級論壇暨第一屆廣州國際腫瘤免疫治療研討會”的《資料匯編》上發(fā)表（第82-87頁）。 （2）該綜述已通過《中華血液學(xué)》初審，現(xiàn)正處于審校階段。
鑒定結(jié)果
- 請見所附“2010遺傳上單倍體相合造血干細(xì)胞移植高級論壇暨第一屆廣州國際腫瘤免疫治療研討會”的《資料匯編》（第82-87頁）及《醫(yī)學(xué)綜述》收錄證明
參考文獻(xiàn)
- 1、同種異體反應(yīng)性造血干細(xì)胞移植 [1]A. Moretta et al. Activating and inhibitory killer immunoglobulin- like receptors (KIR) in haploidentical haemopoietic stem cell transplantation to cure high-risk leukaemia. British Society for Immunology, Clinical and Experimental Immunology, 157: 325–331 [2]Willemze R et al.: KIR-ligand incompatibility in the graft-versus-host direction improves outcomes after umbilical cord blood transplantation for acute leukemia. Leukemia 2009, 23:492-500. 2、淋巴細(xì)胞輸注治療 王喆，段連寧, 造血干細(xì)胞移植后供者淋巴細(xì)胞輸注研究進(jìn)展. 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報, 2010(1): 第82-83頁. 3、單抗阻斷試驗(yàn) Anti-leukemia activity of alloreactive NK cells in KIR ligand-mismatched haploidentical HSCT for pediatric patients. Pende D et al.Blood. 2009 Mar 26;113(13):3119-29. Epub 2008 Oct 22. 4、LDH殺傷試驗(yàn) 周力音等, LDH釋放法檢測NK細(xì)胞活性方法的改進(jìn). 臨床檢驗(yàn)雜志, 1993(3): 第123頁.
同類課題研究水平概述
- 2005年Miller等對部分預(yù)后不良的AML患者給予同種異體NK 細(xì)胞輸入后，患者的復(fù)發(fā)率極大降低，并提高了患者的完全緩解率。這使同種異體NK細(xì)胞輸注在清除白血病母細(xì)胞治愈微小殘留病中的作用成為了國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。 1、國內(nèi)外KIR2DL1-HLA錯配的研究進(jìn)展： （1）吳德沛等分析得出：供者KIR2DL1和KIR3DL2是主要引起NK細(xì)胞同種異體反應(yīng)性的受體,供、受者的KIR/HLA不匹配可能在全相合的無關(guān)供者異基因HSCT中起著十分重要的作用。而KG1A細(xì)胞株對NK殺傷的耐受性不在其討論范圍之內(nèi)。 （2）Cognet C等分析活化性KIR2DS1亞群，KIR2DL1只是與KIR2DS1共有針對HLA-C2群配體的特異性，而對KIR2DL1的抑制機(jī)理未作深入研究。 （3）牛新清等人通過流式細(xì)胞儀檢測、細(xì)胞化學(xué)染色等方法證實(shí)其細(xì)胞株中存在白血病干細(xì)胞，以K562細(xì)胞作為參照，相同效靶比時，NK對KG1A細(xì)胞殺傷率均低于其對K562的殺傷率，說明NK殺傷KG1A細(xì)胞的效果不理想。但其確切的信號通路仍有待闡明。 2、NK細(xì)胞不同KIR2DL1表達(dá)率對靶細(xì)胞殺傷活性影響的研究進(jìn)展 （1）趙翔宇等研究探討幾類高危和標(biāo)危惡性血液病患者KIR基因表達(dá)，證明其具有顯著性差異，而其差異性并未與NK殺傷活性聯(lián)系起來。 （2）Daniela P等對比發(fā)現(xiàn)：表達(dá)KIR2DL1的同種異體NK亞群數(shù)量增加，增強(qiáng)其對缺失C2表位靶細(xì)胞的殺傷，而個體表達(dá)率的差異影響仍未涉及。 （3）Morvan M體外實(shí)驗(yàn)顯示,與C2表達(dá)的細(xì)胞相比,KIR2DL1高頻表達(dá)可以更高效殺傷C2缺失的細(xì)胞，但KG1A細(xì)胞是否也是與此機(jī)制相關(guān)未進(jìn)行探討。 總體存在以下問題： （1）國內(nèi)對KIR2DL1-HLA信號通路無深入研究，少數(shù)有相關(guān)的也只停留在臨床觀察層面。 （2）國內(nèi)外對KG1A細(xì)胞耐受NK殺傷機(jī)制方面的研究仍為空白。 （3）國內(nèi)外對KIR2DL1表達(dá)率的研究，尚未將其與臨床結(jié)合起來，其對NK殺傷活性的影響仍需進(jìn)一步探討。 （4）國外研究未從KIR2DL1-HLA信號通路方面探討對個體KIR2DL1表達(dá)率對NK細(xì)胞殺傷KG1A細(xì)胞的影響。
