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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 通過(guò)構(gòu)建洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因的克隆并構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體，以期通過(guò)轉(zhuǎn)化紅曲獲得高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲菌株。
- 詳細(xì)介紹：
- 心腦血管疾病是全球致死率最高的疾病，預(yù)防和治療心腦血管疾病主要依靠降血脂藥品。以紅曲為原料的降脂藥品占據(jù)了中藥降脂藥品的大部分市場(chǎng)份額，其市場(chǎng)需求量逐年攀升。紅曲中的主要降脂藥用成分為洛伐他汀，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)紅曲為原料的降脂藥品也是以洛伐他汀為指標(biāo)性成分進(jìn)行藥品準(zhǔn)入檢驗(yàn)的。利用分子生物學(xué)手段構(gòu)建洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因mokH、mokF和MplaeA的過(guò)表達(dá)載體。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：進(jìn)一步了解mokH、mokF和MplaeA在紅曲中的功能。并通過(guò)構(gòu)建洛伐他汀的關(guān)鍵基因的過(guò)表達(dá)載體這一研究為下一步工作中轉(zhuǎn)化紅曲獲得洛伐他汀高產(chǎn)菌株打下基礎(chǔ)。 基本思路：采用雙酶切的方法將目的基因與表達(dá)載體連接在一起并轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中驗(yàn)證并保存。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 試圖為利用基因工程的手段獲得高產(chǎn)洛伐他汀的菌株打下前期基礎(chǔ)。此方面的研究目前較少。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 構(gòu)建成功的過(guò)表達(dá)載體可以轉(zhuǎn)化紅曲菌株，通過(guò)篩選獲得洛伐他汀高產(chǎn)菌株，從而降低功能紅曲相關(guān)藥品或保健品的成本。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 紅曲的藥用價(jià)值和保健功效日益引人關(guān)注，其中洛伐他汀作為紅曲主要的降脂因子成為科研熱點(diǎn)和紅曲產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重點(diǎn)。相關(guān)規(guī)定已將洛伐他汀定為功能紅曲的標(biāo)志性功能成分。mokH、mokF和MpleaA是紅曲霉次級(jí)代謝產(chǎn)物洛伐他汀生物合成的關(guān)鍵酶基因，分別編碼轉(zhuǎn)錄因子、脂酰轉(zhuǎn)移酶和正向全局調(diào)控因子，其可能直接或間接控制洛伐他汀的生物合成。本課題的研究?jī)?nèi)容主要是對(duì)上述三個(gè)基因以及所編碼的蛋白進(jìn)行核苷酸序列的同源性分析、氨基酸序列分析、亞細(xì)胞定位分析、疏水性分析以及結(jié)構(gòu)域分析并利用基因工程手段將從紫紅曲霉中克隆得到的上述三個(gè)基因與pCAMBIA1300M載體分別通過(guò)限制酶酶切位點(diǎn)連接，構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體。
獲獎(jiǎng)情況
- 獲得昆明理工大學(xué)首屆大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃優(yōu)秀項(xiàng)目二等獎(jiǎng)。
鑒定結(jié)果
- 該項(xiàng)目具有較好的可實(shí)施性，并已成功構(gòu)建洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因mokH、mokF和MplaeA的過(guò)表達(dá)載體。
參考文獻(xiàn)
- 《洛伐他汀最新研究進(jìn)展》 <Identification of the mokH Gene Encoding Transcription Factor>
同類課題研究水平概述
- 目前對(duì)紅曲洛伐他汀生物合成基因的研究已經(jīng)很成熟，其基因種類和功能也被一一發(fā)現(xiàn)和證實(shí)，傳統(tǒng)的方法多采用改善發(fā)酵條件或通過(guò)大量篩選高產(chǎn)菌株來(lái)實(shí)現(xiàn)洛伐他汀的高產(chǎn)，而通過(guò)基因工程的手段改造菌種使洛伐他汀超表達(dá)的方法卻鮮有報(bào)道。
