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基本信息
- 項(xiàng)目名稱(chēng)：
- 新型食物過(guò)敏原酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的探討
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類(lèi)：
- 生命科學(xué)
- 大類(lèi)：
- 科技發(fā)明制作A類(lèi)
- 簡(jiǎn)介：
- 我們的研究是對(duì)傳統(tǒng)的間接ELISA法進(jìn)行了改良，以特異性抗原包被反應(yīng)板、以酶標(biāo)特異性抗原代替間接ELISA法中的酶標(biāo)記抗人IgE，構(gòu)建雙抗原夾心一步法檢測(cè)食物過(guò)敏原，研究一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確快速、特異性高，適用范圍廣的新型食物過(guò)敏原酶聯(lián)免疫檢測(cè)法。我們以檢測(cè)牛奶過(guò)敏原為例，用包被的β-LG和酶標(biāo)記的β-LG構(gòu)建雙抗原夾心法，捕獲患者血清中的過(guò)敏特異性抗體。研制出新型牛奶過(guò)敏原快速檢測(cè)試劑盒。
- 詳細(xì)介紹：
- 目前鑒別過(guò)敏原有體內(nèi)試驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)試驗(yàn)主要就是皮膚針刺試驗(yàn)，體外檢測(cè)方法主要有放射性變應(yīng)原吸附試驗(yàn)(RAST)、CAP變應(yīng)原檢測(cè)系統(tǒng)及ELISA。但各方法均存在各自的缺陷。我們的研究是在ELISA基礎(chǔ)上，對(duì)傳統(tǒng)的ELISA進(jìn)行改良，研究一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確快速、特異性高，適用范圍廣的新型食品過(guò)敏原酶聯(lián)免疫檢測(cè)法，克服傳統(tǒng)ELISA的缺陷，以便于過(guò)敏原檢測(cè)的廣泛開(kāi)展。 本方法以包被的β-LG（特異性抗原）包被反應(yīng)板和酶標(biāo)記的β-LG構(gòu)建雙抗原夾心法，捕獲患者血清中的過(guò)敏特異性抗體，檢測(cè)牛奶過(guò)敏原。檢測(cè)模式為一步法（見(jiàn)圖1）。同時(shí)檢測(cè)一批牛奶過(guò)敏陽(yáng)性血清和對(duì)照血清，計(jì)算該檢測(cè)方法的靈敏度和特異度，考察試驗(yàn)方法同進(jìn)口試劑盒檢測(cè)結(jié)果的符合率。以天津市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科牛奶過(guò)敏原標(biāo)本為例進(jìn)行ELISA測(cè)定，并與美國(guó)ASI公司IVT過(guò)敏原體外檢測(cè)試劑盒確診的結(jié)果進(jìn)行比較以判斷特異度和靈敏度。通過(guò)使用雙抗原夾心法測(cè)定由天津市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科提供的40份過(guò)敏原血清以及四十份正常血清樣本，與美國(guó)ASI公司IVT過(guò)敏原體外檢測(cè)試劑盒檢測(cè)出的金標(biāo)準(zhǔn)比較，計(jì)算得出雙抗原夾心法的靈敏度為82.5%,特異度為95%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（+PV）為94.3%,陰性預(yù)測(cè)值（-PV）為84.4%。 綜合考慮，該方法具有廣泛的推廣使用性。本方法有較好的靈敏性、穩(wěn)定性、特異性、重復(fù)性和較好檢測(cè)范圍，技術(shù)簡(jiǎn)便、成本較低，適合于大規(guī)模樣本的檢測(cè)，有利于基層醫(yī)院臨床應(yīng)用的推廣。
作品圖片
作品專(zhuān)業(yè)信息
設(shè)計(jì)、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點(diǎn)、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)
- 目的：目前鑒別過(guò)敏原有體內(nèi)試驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)試驗(yàn)主要就是皮膚針刺試驗(yàn)，體外檢測(cè)方法主要有放射性變應(yīng)原吸附試驗(yàn)(RAST)、CAP變應(yīng)原檢測(cè)系統(tǒng)及ELISA。但各方法均存在各自的缺陷。我們的研究是在ELISA基礎(chǔ)上，對(duì)傳統(tǒng)的ELISA進(jìn)行改良，研究一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確快速、特異性高，適用范圍廣的新型食品過(guò)敏原酶聯(lián)免疫檢測(cè)法，克服傳統(tǒng)ELISA的缺陷，以便于過(guò)敏原檢測(cè)的廣泛開(kāi)展。 基本思路：本方法以包被的β-LG（特異性抗原）包被反應(yīng)板和酶標(biāo)記的β-LG構(gòu)建雙抗原夾心法，捕獲患者血清中的過(guò)敏特異性抗體，檢測(cè)牛奶過(guò)敏原。檢測(cè)模式為一步法（見(jiàn)圖1）。同時(shí)檢測(cè)一批牛奶過(guò)敏陽(yáng)性血清和對(duì)照血清，計(jì)算該檢測(cè)方法的靈敏度和特異度，考察試驗(yàn)方法同進(jìn)口試劑盒檢測(cè)結(jié)果的符合率。以天津市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科牛奶過(guò)敏原標(biāo)本為例進(jìn)行ELISA測(cè)定，并與美國(guó)ASI公司IVT過(guò)敏原體外檢測(cè)試劑盒確診的結(jié)果進(jìn)行比較以判斷特異度和靈敏度。 項(xiàng)目的關(guān)鍵問(wèn)題及技術(shù)指標(biāo)：1.探索最佳反應(yīng)濃度。使用美國(guó)沃克公司提供的β-LG包被微孔板。通過(guò)實(shí)驗(yàn)摸索出最佳包被濃度，以求達(dá)到最佳的反應(yīng)效果。2.酶標(biāo)記抗原過(guò)程中的相關(guān)問(wèn)題。傳統(tǒng)ELISA是使用酶標(biāo)二抗，而我方法采用酶標(biāo)記抗原，需要注意標(biāo)記過(guò)程中產(chǎn)生的一系列問(wèn)題。
科學(xué)性、先進(jìn)性
- 我們的研究是在ELISA基礎(chǔ)上，對(duì)傳統(tǒng)的ELISA法進(jìn)行了改良，以特異性抗原包被反應(yīng)板、以酶標(biāo)特異性抗原代替間接ELISA法中的酶標(biāo)記抗人IgE，構(gòu)建雙抗原夾心一步法檢測(cè)食物過(guò)敏原。 本實(shí)用新型為基于雙抗原夾心法的食物過(guò)敏檢測(cè)方法，改變傳統(tǒng)的間接ELISA法檢測(cè)模式。以牛奶過(guò)敏原為例，用牛奶過(guò)敏原分別包被微孔板和標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶制成酶標(biāo)抗原，用于識(shí)別和捕獲患者血清中的牛乳過(guò)敏特異性抗體，再通過(guò)催化底物顯色來(lái)判斷結(jié)果。 與現(xiàn)有檢測(cè)方法相比，本檢測(cè)方法具有如下特點(diǎn)：1.雙抗原夾心法檢測(cè)采用了兩步特異性反應(yīng)，避免了傳統(tǒng)間接法ELISA中酶標(biāo)二抗識(shí)別IgE缺乏針對(duì)性的缺點(diǎn)，使特異性得到很大提高，極大地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。2．利用雙抗原反應(yīng)的高特異性，可檢測(cè)出由過(guò)敏產(chǎn)生的任何類(lèi)型抗體，克服了間接法中只識(shí)別IgE型抗體的缺點(diǎn)，提高檢出率。3.測(cè)量時(shí)血清不需稀釋?zhuān)蓽p少因標(biāo)本稀釋帶來(lái)的誤差。4.只需一步孵育反應(yīng)，簡(jiǎn)便快捷，省時(shí)省力，適合批量篩查。
獲獎(jiǎng)情況及鑒定結(jié)果
- 無(wú)
作品所處階段
- 實(shí)驗(yàn)室階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 無(wú)
作品可展示的形式
- 實(shí)物、產(chǎn)品，圖片，錄像，樣品，宣傳冊(cè)
使用說(shuō)明,技術(shù)特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì),適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說(shuō)明,市場(chǎng)分析,經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測(cè)
- 使用說(shuō)明：在包被了β-LG的微孔中加入10μl的血清原液和100μl的酶標(biāo)記β-LG，37 ℃孵育1 hour，洗板5次拍干后加入顯色液A、B各50μl，室溫避光反應(yīng)15min，后加入終止液，以620nm為參考波長(zhǎng)，測(cè)定450nm處的吸光度（A450）。 特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)：其特征是反應(yīng)的原理為雙抗原夾心法而非間接法，不需要酶標(biāo)抗體而使用酶標(biāo)記抗原，用于包被的抗原和用于標(biāo)記酶的抗原為同一過(guò)敏原。 適用范圍及推廣前景：過(guò)敏原篩查是過(guò)敏性疾病診斷治療的中心環(huán)節(jié)。其中雙抗原夾心用于過(guò)敏原篩查尚未見(jiàn)報(bào)道，該方法具有較高特異性，適合于大規(guī)模樣本的檢測(cè)。 市場(chǎng)效益和經(jīng)濟(jì)預(yù)測(cè)：項(xiàng)目推廣將打破進(jìn)口試劑的壟斷地位，對(duì)開(kāi)發(fā)具有當(dāng)?shù)靥厣^(guò)敏原診斷試劑具有重要意義，經(jīng)濟(jì)效益可觀(guān)。 本方法僅以牛奶過(guò)敏原為例進(jìn)行探討，隨著研究的深入，還可對(duì)其他常見(jiàn)食物過(guò)敏原進(jìn)行檢測(cè)，具有很大的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
同類(lèi)課題研究水平概述
- 目前，國(guó)外臨床上常用的食物過(guò)敏原體外檢測(cè)方法主要有放射性變應(yīng)原吸附試驗(yàn)(RAST)、CAP變應(yīng)原檢測(cè)系統(tǒng)及ELISA。RAST檢測(cè)sIgE特異性高，影響因素少，與皮膚試驗(yàn)和支氣管激發(fā)試驗(yàn)符合率高，且安全。但是該檢測(cè)方法存在放射性核素污染，并且待測(cè)標(biāo)本中有相同特異性的IgG時(shí)，該檢測(cè)結(jié)果將會(huì)受影響。CAP變應(yīng)原檢測(cè)系統(tǒng)避免了RAST的放射性核素污染，且CAP上特異性結(jié)合的是抗IgE，也避免了IgG的影響。然而我國(guó)目前尚未自行研制出相應(yīng)的儀器及試劑，故多為進(jìn)口儀器和試劑，不僅成本較高，而且變應(yīng)原具有明顯的地域性，我國(guó)的變應(yīng)原并不完全符合，故存在一定的檢測(cè)誤差。目前ELISA檢測(cè)方法尚存在些許缺陷，酶標(biāo)記抗人IgE價(jià)格昂貴，大多依靠進(jìn)口，制備復(fù)雜，適用范圍有限，不適合大規(guī)模推廣使用。 我國(guó)國(guó)內(nèi)臨床上常用的食物過(guò)敏原檢測(cè)方法主要為間接法ELASA，尚未有雙抗原夾心法相關(guān)的報(bào)道。
