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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 銀耳酸性多糖分離純化及抗氧化機(jī)理研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 目前關(guān)于多糖的制備、結(jié)構(gòu)、藥理學(xué)、臨床學(xué)等方面已有大量研究，其多方面的生物活性已經(jīng)得到開發(fā)和應(yīng)用。但由于分離到的多糖，大多數(shù)都是一些未經(jīng)優(yōu)化的雜多糖。加之生長環(huán)境、提取分離技術(shù)的不同而造成多糖結(jié)構(gòu)及活性的差異。不利于發(fā)揮多糖的最佳功效，給進(jìn)一步研究帶來了困難，使在分子水平上闡明其藥理作用和作用機(jī)制受到很大限制。 本研究綜合利用現(xiàn)代分析手段，解決多糖的純化技術(shù)，形成工藝化方案或純品標(biāo)準(zhǔn)，為多糖類生物活性物質(zhì)的研究提供解決方案。本多糖的純化技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于銀耳、柴胡、川芎、枸杞、牛膝和多種食用菌多糖的研究。 本研究在體外化學(xué)模擬建立抗氧化模型對銀耳純一多糖進(jìn)行篩選。從清除自由基方面的能力來評價(jià)多糖的生物活性。本研究對銀耳多糖進(jìn)行深入研究，并綜合利用現(xiàn)代分析手段，解釋銀耳多糖抗氧化機(jī)制，為探索多糖生物學(xué)活性研究方案提供參考。
- 詳細(xì)介紹：
- 一：首次獲得了銀耳酸性多糖組分TPP2。通過對四川省道地藥材通江銀耳進(jìn)行提取、分離和主要成分篩選。采用水提醇析法提取多糖，銀耳多糖經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析，獲得了通江銀耳活性多糖成分－TPP2。 二：首次對不同產(chǎn)地的銀耳進(jìn)行了比較研究。通江銀耳TPP2含量高達(dá)95.54%，其它產(chǎn)地銀耳TPP2含量在0.6％～79.25％之間。 三：建立了通江椴木銀耳的簡易鑒別方法。從銀耳的形體和吸水率兩個(gè)方面進(jìn)行鑒別。在形體上，通江椴木銀耳的子實(shí)體比其它銀耳的要小且短而密，膠質(zhì)體厚、質(zhì)地較硬，而其它銀耳的子實(shí)體較大、膠質(zhì)體薄、質(zhì)地較軟。在吸水率上，椴木銀耳的吸水一般在2~4倍之間，而其它銀耳的吸水率在8倍以上。 四：多糖含量測定方法改進(jìn)。改進(jìn)后的方法與老方法相比最大的優(yōu)點(diǎn)是提高了檢測的重現(xiàn)性與準(zhǔn)確性。并且簡化了操作（老方法取樣四次，新方法取樣兩次），這樣減少了偶然誤差和系統(tǒng)誤差的產(chǎn)生，有利于用于實(shí)際工作中對糖的檢測。 五：TPP2體外抗氧化試驗(yàn)。以清除羥基自由基、超氧陰離子自由基和對油脂的抗氧化能力試驗(yàn)，建立體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?。體外實(shí)驗(yàn)表明，TPP2清除羥基自由基EC50為66.5?g/mL；TPP2清除超氧陰離子自由基（O2-?）EC50為 0.264 mg/ml。TPP2抗氧化能力優(yōu)于VE，接近VC。 六：TPP2清除自由基作用機(jī)制初探。TPP2可以通過捕捉脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中產(chǎn)生的自由基，達(dá)到對自由基的直接清除作用；TPP2通過與產(chǎn)生自由基所必需的金屬離子發(fā)生絡(luò)合作用，對自由基起間接清除作用。TPP2可通過提高SOD、GSH - Px等抗氧化酶的活性，從而發(fā)揮抗氧化的作用。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本研究綜合利用現(xiàn)代分析手段，解決多糖的純化技術(shù)，形成工藝化方案或純品標(biāo)準(zhǔn)，為多糖生物活性物質(zhì)的研究提供解決方案。 本研究在體外化學(xué)模擬建立抗氧化模型對銀耳純一多糖進(jìn)行篩選,并綜合利用現(xiàn)代分析手段，解釋銀耳多糖抗氧化機(jī)制，為探索多糖生物學(xué)活性研究方案提供參考。 銀耳多糖的分離及含量測定→多糖的純化→銀耳多糖的單糖組成→多糖抗氧化體系建立→銀耳多糖抗氧化能力評價(jià)→多糖抗氧化機(jī)理初探
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 一：通過對銀耳多糖進(jìn)行分離純化，首次獲得了銀耳酸性多糖組分TPP2。 二：首次對不同產(chǎn)地的銀耳進(jìn)行了比較研究。通江銀耳TPP2含量最高。 三：從銀耳的形體和吸水率兩個(gè)方面，建立了通江椴木銀耳的簡易鑒別方法。 四：對多糖含量測定方法進(jìn)行了改進(jìn)。簡化了操作、提高了檢測的重現(xiàn)性與準(zhǔn)確性。 五：以清除自由基和對油脂的抗氧化能力試驗(yàn)，建立體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?。對TPP2清除自由基作用機(jī)制進(jìn)行了初步探索。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 建立了通江椴木銀耳的簡易鑒別方法，已經(jīng)被巴中市通江縣采用。該項(xiàng)工作填補(bǔ)了國內(nèi)空白。 改進(jìn)了多糖含量測定方法，檢測的重現(xiàn)性與準(zhǔn)確性高。目前，已經(jīng)在我校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的多糖研究中成為標(biāo)準(zhǔn)方法。并被《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》在教學(xué)中采用。 多糖純化技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于柴胡、川芎、枸杞、牛膝和多種食用菌多糖的研究。 在體外化學(xué)模擬建立抗氧化模型，解釋銀耳多糖抗氧化機(jī)制，為探索多糖生物學(xué)活性研究方案提供參考。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目前關(guān)于多糖的制備、結(jié)構(gòu)、藥理學(xué)、臨床學(xué)等方面已有大量研究，其多方面的生物活性已經(jīng)得到開發(fā)和應(yīng)用。但由于分離到的多糖，大多數(shù)都是一些未經(jīng)優(yōu)化的雜多糖。加之生長環(huán)境、提取分離技術(shù)的不同而造成多糖結(jié)構(gòu)及活性的差異。不利于發(fā)揮多糖的最佳功效，給進(jìn)一步研究帶來了困難，使在分子水平上闡明其藥理作用和作用機(jī)制受到很大限制。 本研究綜合利用現(xiàn)代分析手段，解決多糖的純化技術(shù)，形成工藝化方案或純品標(biāo)準(zhǔn)，為多糖類生物活性物質(zhì)的研究提供解決方案。本多糖的純化技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于銀耳、柴胡、川芎、枸杞、牛膝和多種食用菌多糖的研究。 本研究在體外化學(xué)模擬建立抗氧化模型對銀耳純一多糖進(jìn)行篩選。從清除自由基方面的能力來評價(jià)多糖的生物活性。本研究對銀耳多糖進(jìn)行深入研究，并綜合利用現(xiàn)代分析手段，解釋銀耳多糖抗氧化機(jī)制，為探索多糖生物學(xué)活性研究方案提供參考。
獲獎(jiǎng)情況
- [1]顏軍,徐光域,郭曉強(qiáng)等.銀耳粗多糖的純化及抗氧化活性研究,食品科學(xué)，2005,26（9）:169-172； [2]顏軍,郭曉強(qiáng),徐光域等.銀耳多糖的提取及其清除自由基作用,成都大學(xué)學(xué)報(bào),2006,25(1):35-38； [3] 2007年，通江銀耳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及產(chǎn)品開發(fā)，獲四川省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)； [4] 2007年，通江銀耳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及產(chǎn)品開發(fā)，獲成都市科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)； [5] 2008年，一種速溶銀耳粉的制備方法和所制得的速溶銀耳粉，獲國家專利授權(quán)。
鑒定結(jié)果
- 該項(xiàng)目不僅建立了通江銀耳的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而且研制成套實(shí)用技術(shù)三套，專利1項(xiàng)，論文9篇，是一項(xiàng)在中藥藥食同源領(lǐng)域研究難度大，技術(shù)含量高，應(yīng)用效益好，推廣前景廣闊的成果，在國內(nèi)同類研究中居領(lǐng)先水平。
參考文獻(xiàn)
- [1]夏爾寧,陳瓊?cè)A.銀耳子實(shí)體多糖的分離、分析及生物活性[J].真菌學(xué)報(bào),1988 ,7 (7) :166-174. [2]顏軍,徐光域,郭曉強(qiáng)等.銀耳粗多糖的純化及抗氧化活性研究,食品科學(xué)，2005,26（9）:169-172. [3]顏軍,郭曉強(qiáng),徐光域等.銀耳多糖的提取及其清除自由基作用,成都大學(xué)學(xué)報(bào),2006,25(1):35-38. [4]顏軍,郭曉強(qiáng),鄔曉勇等. 非衍生化HPLC法分析銀耳多糖中單糖組成的初步研究,食品科學(xué),2007,28（7）:446-449. [5]Masaki H, Kaluta M.Studies on interrelation of structureand antitumor effects of polysaccharide[J ]. Car Res , 1981 ,92 : 115-129. [6]Nanba H, Kuroda H.The chemical structure of an antitumorpolysaccharide in mycelia of Cochliobol us myabernus [ J ].Chem Pharm Bull , 1987 (3) : 1285-12881
同類課題研究水平概述
- 近年來，銀耳的研究主要集中在免疫增強(qiáng)及其機(jī)制上，銀耳的諸多生理活性(包括抗腫瘤在內(nèi))都是建立在多糖對免疫增強(qiáng)的基礎(chǔ)上。癌癥的發(fā)生和人體衰老是多因素引起的多階段過程，自由基學(xué)說是主要學(xué)說之一?；谧杂苫鶎W(xué)說，活性自由基在復(fù)雜的多階段癌變中起重要作用。因此，人體補(bǔ)充適量的自由基清除劑是抗衰老的主要措施之一。清除自由基對人體健康具有重要意義。 目前，多糖研究的層次與水平，還遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于蛋白質(zhì)和核酸，主要集中體現(xiàn)在多糖結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系、體內(nèi)代謝過程與作用機(jī)制尚未闡明。限制多糖研究的主要“瓶頸”問題是多糖的分析手段欠缺與構(gòu)效關(guān)系不明確，從而導(dǎo)致難以在分子水平闡明藥理作用和作用機(jī)制。 1.銀耳多糖現(xiàn)有分離純化方法和手段 近年來，文獻(xiàn)資料關(guān)于多糖的分離純化的報(bào)道很多，但方法大多雷同。課題組在這方面也做了大量的工作。由于銀耳多糖的分子量巨大。目前的分離方法一般是采用柱分離的手段。 首先，采用DEAE-纖維素柱色譜法，不僅可以分離多糖，而且能達(dá)到脫色的目的。然后，采用凝膠柱色譜法，根據(jù)多糖分子大小和形狀的不同實(shí)現(xiàn)分離，以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑，使不同大小的多糖分子得到分離純化。 測定多糖純度的方法有很多，如電泳主要是采用醋酸纖維薄膜電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、玻璃纖維紙電泳等。另外，常采用的是色譜技術(shù)，以各種凝膠的柱色譜較好，必須得到單一對稱狹窄的峰。但由于多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，給多糖的純度鑒定帶來了很多困難。多糖的電泳所檢查的帶一般都較寬。色譜法則應(yīng)該用三種以上的色譜系統(tǒng)證明樣品的純度。 2.多糖的生物功能可以測定，但反應(yīng)機(jī)制并不清楚，缺乏分析手段。 文獻(xiàn)報(bào)道，多糖具有較多的生物功能且作用明顯。要評價(jià)多糖的生物活性采用的方法主要是清除自由基的體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。但無論是體外模型還是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，其主要作用是對多糖的抗氧化能力進(jìn)行評價(jià)。雖然報(bào)道了很多多糖都具有清除自由基的作用，但其作用機(jī)理不明。目前，還未見采用這些模型來進(jìn)行銀耳多糖抗氧化機(jī)理研究的報(bào)道。究其原因是對反應(yīng)機(jī)理的研究手段的欠缺。 綜上所述，長期研究發(fā)現(xiàn)，銀耳多糖又具有較高的生物活性。因此，有必要對銀耳多糖進(jìn)行生物活性篩選，深入研究活性銀耳多糖的序列結(jié)構(gòu)，為銀耳多糖生物活性的機(jī)理闡釋、構(gòu)效關(guān)系研究提供新方法和新手段。
