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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- KIR等免疫相關(guān)分子對(duì)于淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相互作用的影響
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本作品研究了殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體（KIR）基因多態(tài)性與腫瘤發(fā)生的關(guān)聯(lián)性，作品重點(diǎn)研究8個(gè)KIR抑制性受體（2DLI-2DL5、3DL1-3DL3），6個(gè)KIR活化性受體（2DS1-2DS5、3DS1）以及兩個(gè)編碼促進(jìn)活化作用的輔助蛋白DAP10，DAP12基因共16個(gè)基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中的表達(dá)水平差異等。
- 詳細(xì)介紹：
- 目的：研究KIR基因家族在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中表達(dá)水平差異以及在細(xì)胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞過程中KIR基因家族的變化情況，探討KIR的抑制性受體和活化性受體的表達(dá)變化趨勢(shì)，為進(jìn)一步研究KIR與腫瘤的相關(guān)性奠定基礎(chǔ)，對(duì)尋找腫瘤治療的關(guān)鍵基因以及為后續(xù)基于該基因的生物治療或者細(xì)胞因子藥物開發(fā)提供有益的參考。方法: 利用RT-PCR的方法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC與腫瘤細(xì)胞在不同效靶比與不同時(shí)間點(diǎn)共孵育的條件下，KIR基因家族的表達(dá)變化趨勢(shì)；利用ELISA方法檢測(cè)IFN-γ的分泌變化以反映PBMC的活性變化；利用激光共聚焦顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞的凋亡情況；利用IL-1β，IL-2，IFN-γ，OK-T3，PHA(植物凝集素）等細(xì)胞因子將PBMC誘導(dǎo)成殺瘤活性高的CIK細(xì)胞，同時(shí)流式細(xì)胞儀檢測(cè)PBMC在誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞達(dá)到增殖最高峰前后細(xì)胞免疫表型的變化，并利用RT-PCR檢測(cè)CIK細(xì)胞的KIR基因家族變化。結(jié)果：RT-PCR的結(jié)果表明PBMC在與腫瘤細(xì)胞共孵育前后，KIR家族中的活化性受體起主導(dǎo)作用，其中DAP12的表達(dá)在共孵育的不同效靶比及不同時(shí)間點(diǎn)條件下出現(xiàn)規(guī)律性的變化；ELISA結(jié)果表明，在不同效靶比不同時(shí)間點(diǎn)共孵育過程中，PBMC分泌IFN-γ情況呈現(xiàn)規(guī)律性變化，且變化情況與RT-PCR結(jié)果相吻合；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型的結(jié)果顯示，PBMC在誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞達(dá)增殖最高峰前后，細(xì)胞表面免疫分子CD3、CD8、CD56的表達(dá)顯著提高，PBMC的活性大大增強(qiáng)；RT-PCR結(jié)果顯示PBMC在誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞達(dá)增殖最高峰前后，KIR家族的活化性受體也出現(xiàn)表達(dá)升高趨勢(shì)，且2DS4基因的表達(dá)從弱到強(qiáng)，DAP12基因的表達(dá)從無到有。結(jié)論: 在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，KIR家族中的活化性受體起主導(dǎo)作用，且個(gè)別基因的表達(dá)呈現(xiàn)規(guī)律性變化，DAP12基因有可能是KIR家族中對(duì)抗腫瘤的關(guān)鍵基因，2DS4有可能是在腫瘤發(fā)生時(shí)的重要基因。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 研究的基本思路是RT-PCR檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC與腫瘤細(xì)胞在不同效靶比和不同時(shí)間點(diǎn)共孵育的條件下，KIR基因家族的表達(dá)變化趨勢(shì)，同時(shí)用ELISA檢測(cè)在共孵育過程中PBMC活性變化，激光共聚焦顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞的凋亡情況；流式細(xì)胞儀檢測(cè)在誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞前后細(xì)胞免疫表型的變化，利用RT-PCR檢測(cè)誘CIK細(xì)胞過程中KIR基因家族變化，結(jié)合共孵育的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，加強(qiáng)驗(yàn)證。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 本研究檢測(cè)了外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC與腫瘤細(xì)胞在不同效靶比不同時(shí)間點(diǎn)共孵育條件下KIR基因家族的表達(dá)變化情況；另一獨(dú)特之處在于對(duì)比誘導(dǎo)PBMC形成殺瘤活性強(qiáng)的CIK細(xì)胞前后KIR基因家族的變化情況，進(jìn)一步驗(yàn)證活化的PBMC中KIR基因家族的表達(dá)情況，結(jié)合PBMC與腫瘤共孵育的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，增強(qiáng)說服力。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 腫瘤的生物治療越來越受到研究者的關(guān)注，本研究的價(jià)值和意義在于，通過研究KIR基因家族在腫瘤的發(fā)生過程的表達(dá)變化情況，了解KIR家族的活化性和抑制性受體的變化趨勢(shì)，希望找出KIR基因家族中對(duì)抗腫瘤的關(guān)鍵基因，以期為腫瘤的生物治療或者藥物開發(fā)提供新的靶點(diǎn)和思路。
學(xué)術(shù)論文摘要
- RT-PCR的結(jié)果表明PBMC在與腫瘤細(xì)胞共孵育前后，KIR家族中的活化性受體起主導(dǎo)作用，其中DAP12的表達(dá)在共孵育的不同效靶比及不同時(shí)間點(diǎn)條件下出現(xiàn)規(guī)律性的變化；ELISA結(jié)果表明，在不同效靶比不同時(shí)間點(diǎn)共孵育過程中，PBMC分泌IFN-γ情況呈現(xiàn)規(guī)律性變化，且變化情況與RT-PCR結(jié)果相吻合；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型的結(jié)果顯示，PBMC在誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞達(dá)增殖最高峰前后，細(xì)胞表面免疫分子CD3、CD8、CD56的表達(dá)顯著提高，PBMC的活性大大增強(qiáng)；RT-PCR結(jié)果顯示PBMC在誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞達(dá)增殖最高峰前后，KIR家族的活化性受體也出現(xiàn)表達(dá)升高趨勢(shì)，且2DS4基因的表達(dá)從弱到強(qiáng)，DAP12基因的表達(dá)從無到有。結(jié)論: 在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，KIR家族中的活化性受體起主導(dǎo)作用，且個(gè)別基因的表達(dá)呈現(xiàn)規(guī)律性變化，DAP12基因有可能是KIR家族中對(duì)抗腫瘤的關(guān)鍵基因，2DS4有可能是在腫瘤發(fā)生時(shí)的重要基因。
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，KIR家族中的活化性受體起主導(dǎo)作用，且個(gè)別基因的表達(dá)呈現(xiàn)規(guī)律性變化，DAP12基因有可能是KIR家族中對(duì)抗腫瘤的關(guān)鍵基因，2DS4有可能是在腫瘤發(fā)生時(shí)的重要基因。
參考文獻(xiàn)
- [1] Amanda K. PURDY, Kerry S. CAMPBELL. Natural Killer Cells and Cancer Regulation by the Killer Cell Ig-like Receptors (KIR).Chin J Lung Cancer.2010,13(7):731-743 [3] NicolasAnfossi,Jean-MarcDoisne, Marie-AlixPeyrat. Coordinated Expression of Ig-Like Inhibitory MHC Class I Receptors and Acquisition of Cytotoxic Function in Human CD8+ T Cells. The Journal of Immunology.2004,173:7223-C722 [9] 李長(zhǎng)纓、胡彬、劉曉華等.KIR基因的基礎(chǔ)與應(yīng)用[J].中國輸血雜志.2008,21(9)：722-724 [10] 張健、劉義慶、盧志明等. KIR多態(tài)性與相關(guān)疾病的研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥.2009,49（31）：116-118 [11] 竇立萍、達(dá)萬明、黃文榮等. 健康人外周血KIR表達(dá)規(guī)律分析[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志.2010,18(1):132-135 [12] 付紹杰，于立新，羅敏等. NK細(xì)胞表面免疫球蛋白受體KIR基因的分析[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2009,29(1):109-113 [13] 孟慶國、盧永田、范獻(xiàn)良. 殺傷細(xì)胞免疫球蛋白牙膏受體基因多態(tài)性與鼻咽癌的關(guān)聯(lián)性[J].山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào).2008,3（22）：196-199
同類課題研究水平概述
- 自從1997年,Uhrberg首次采用PCR-SSP方法對(duì)KIR進(jìn)行了基因分型后，目前共發(fā)現(xiàn)有18個(gè)KIR基因，除了15個(gè)抑制性和活化性的KIR基因外還包括假基因XV、X和KIR2DP1。 近年來隨著對(duì)其分子生物學(xué)基礎(chǔ)方面研究的深入,人們對(duì)其在移植免疫、抗感染免疫、腫瘤免疫等方面的作用十分關(guān)注并進(jìn)行了大量研究，其中KIR在抗腫瘤方面的研究更是熱點(diǎn)領(lǐng)域。目前國內(nèi)外的熱點(diǎn)主要集中在KIR的多態(tài)性與某些疾病發(fā)生的易感性與關(guān)聯(lián)性研究，KIR通過識(shí)別表達(dá)于靶細(xì)胞表面的HLA-1類分子和部分非典型的MHC分子，來調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的殺傷活性，從而在自身免疫性疾病、妊娠、移植排斥等生理病理過程中起重要作用。目前很多研究者通過實(shí)驗(yàn)論證在某種特定的腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中的基因頻率變化，并提出一些可能的猜想，試圖尋找規(guī)律，KIR中的某些基因也被提出可能跟某些腫瘤或其他疾病存在有統(tǒng)計(jì)意義的相關(guān)性，目前已有部分研究經(jīng)過論證，但仍未有權(quán)威的證實(shí)。KIR基因家族較龐大并且同個(gè)家族之間有著很大的同源性，這對(duì)于尋找對(duì)抗某種疾病的關(guān)鍵基因帶來一定的困擾，對(duì)于KIR的研究目前仍處于探索階段。 對(duì)于CIK細(xì)胞，目前國內(nèi)外的研究主要集中在利用誘導(dǎo)形成CIK細(xì)胞實(shí)現(xiàn)抗腫瘤過繼免疫治療的方案，它強(qiáng)大的抗瘤活性、廣泛的殺瘤譜和精確的“點(diǎn)射”腫瘤細(xì)胞而不傷及正常細(xì)胞的特性使它成為一種新的更加有效的生物治療手段。目前CIK細(xì)胞療法是近年來經(jīng)過國內(nèi)外科學(xué)家的共同努力而研制出的一種抗腫瘤細(xì)胞活性最強(qiáng)的生物療法。
