基本信息
- 項目名稱：
- 懷地黃多糖美容護膚作用的研究
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術(shù)論文
- 簡介：
- 在“四大懷藥”之地黃美容功效的研究中，實驗主要通過測定小鼠皮膚羥脯氨酸含量、SOD活性及MDA水平，反映地黃多糖影響的皮膚衰老的機制。另通過研究地黃多糖對小鼠血象、皮膚組織、免疫器官、肝臟及卵巢組織的影響，進一步證明地黃多糖美容功效的科學性。若將實驗成果應用于研制、生產(chǎn)美容保健產(chǎn)品，必將會創(chuàng)造出巨大的社會價值和經(jīng)濟效益。
- 詳細介紹：
- 摘 要實驗目的：研究懷地黃多糖的美容護膚作用實驗方法: 取體重20-23g的雌性小鼠30只，隨機分為3組，分別灌服大、小劑量的懷地黃多糖混懸液（以0.5%CMC-Na配制成200mg/kg ，100mg/kg； 10mg/ml， 5mg/ml；0.2ml/10g）及同體積的0.5%CMC-Na，每天給藥1次，連續(xù)給藥14天，于第14天給藥前將小鼠背部皮膚脫毛（脫毛區(qū)面積1cm2），于最后1次給藥后2小時，小鼠眼眶取血，一部分全血用于測定血常規(guī)，另一部分用1%肝素抗凝?？鼓聪鄳噭┖姓f明書方法測定紅細胞SOD活力，離心后取血漿按相應試劑盒說明書方法測定血漿MDA水平；然后脫頸椎處死小鼠，取小鼠脫毛區(qū)皮膚，按相應試劑盒說明書方法測定皮膚中羥脯氨酸含量。再取其胸腺、皮膚組織、肝臟、脾臟、卵巢臟器，10%甲醛固定，經(jīng)包埋、脫水、切片、染色等流程，制備相應組織切片，對切片進行病理觀察。實驗結(jié)論:由上述實驗結(jié)果可知，本研究物質(zhì)可以通過提高皮膚羥脯氨酸含量，增加皮膚彈性，發(fā)揮直接的護膚作用；還可以通過升高血超氧化物歧化酶（SOD）活性、降低血過氧化脂（MDA）水平，增強機體免疫力，促進機體造血功能等發(fā)揮間接護膚作用。在對皮膚有良好的抗氧化，抗衰老的保護作用的前提下無毒副作用，是皮膚保健品制備上的新創(chuàng)造，其制備成功為懷地黃的開發(fā)、應用做出創(chuàng)造性貢獻，經(jīng)濟和社會效益巨大。 目 錄一、地黃多糖的研究現(xiàn)狀…………………………………………3 二、關(guān)于地黃多糖美容養(yǎng)顏作用的市場前景調(diào)查………………6 調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計與分析…………………………………………7 三、懷地黃多糖美容護膚作用的研究……………………………9 1.實驗目的……………………………………………………9 2.實驗藥品……………………………………………………9 3.實驗方法……………………………………………………9 3.1分組給藥…………………………………………………9 3.2樣品制備及測定方法……………………………………9 4.實驗結(jié)果……………………………………………………12 5.實驗討論……………………………………………………16 6.實驗結(jié)論……………………………………………………20 四、 地黃多糖美容護膚產(chǎn)品的前景展望…………………………21 1. 產(chǎn)品背景……………………………………………………21 2. 市場背景……………………………………………………21 3. 產(chǎn)品展望……………………………………………………23 附………………………………………………………………………24 一、地黃多糖的研究現(xiàn)狀我省“四大懷藥”之一的地黃為玄參科植物地黃（Rehmannia glutinosaLibosch.）的干燥根莖。生地黃具有滋陰清熱作用，熟地黃具有補血滋陰、益精填髓的功效，是優(yōu)良的滋陰補血藥，被譽為“壯水之主，補血之君”，廣泛用于陰虛、血虛所致的各種疾病。作為地黃中的有效成分之一，地黃多糖近年來倍受廣大科研人員的青睞。地黃中含有水蘇糖、棉子糖、葡萄糖、甘露三糖、毛蕊花糖、半乳糖及地黃多糖α、地黃多糖β等糖類成分。鮮地黃中水蘇糖含量最高,達總糖的64.9%[1],在干地黃中達地黃干重的30%左右。近年來對地黃多糖類化學成分研究較多,李計萍等[2 ]用苯酚- 硫酸比色法對地黃的干品和鮮品還原糖和多糖類成分含量進行比較研究,測出還原糖含量干地黃中為140.3mg/g～287.3mg/g,鮮地黃中為272.3mg/g～467.9mg/g (以干品計算);多糖含量干地黃中為31.3mg/g～50. 5mg/g ,鮮地黃中為90.2mg/g～98.6mg/g (以干品計算),還原糖和多糖的含量都是鮮品比干品高,而六碳糖、蔗糖及三糖含量低于干地黃[3] 。李紅霞等[4]采用同樣的方法對熟懷地黃的中性多糖進行含量測定,測定波長為483nm,測得多糖含量為65.9mg/g。除以上成分外,Anh 等[5]還從越南地黃根莖中分離出一個新的天然產(chǎn)物2 ,4 - 二甲氧基- 2 - 甲基- 6H - 吡喃- 3 - 酮,并用核磁共振光譜學測定了其結(jié)構(gòu)。隨著科技的發(fā)展,地黃的化學組成也越來越清楚,但仍有待進一步研究?，F(xiàn)將從1989年至今的有關(guān)地黃多糖藥理學功效的研究整理如下，為我們對地黃多糖的進一步研究奠定了基礎。 1. 增強免疫功能和抗腫瘤作用。陳力真等[ 6～9]用地黃多糖α和地黃多糖β進行實驗，觀察對小鼠T淋巴細胞增殖的影響以及對接種S180瘤細胞小鼠瘤體重量的影響，發(fā)現(xiàn)地黃多糖β是地黃中兼具免疫與抑瘤活性的有效成分。進一步研究發(fā)現(xiàn)，地黃多糖β可以顯著提高小鼠脾臟T淋巴細胞的分泌能力。同時系統(tǒng)研究了抑瘤作用的機理，用含有地黃多糖β的培養(yǎng)液培養(yǎng)S180細胞和HL60細胞，在24h和48h時觀察瘤細胞的生長情況。結(jié)果表明，地黃多糖β沒有直接殺傷瘤株細胞的作用，抑瘤作用與其調(diào)動和增強T淋巴細胞的功能密切相關(guān)。 2.對造血功能的影響。劉福君等[10～13]經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，地黃多糖可明顯促進正常小鼠骨髓造血干細胞（CFU- S）、粒單系祖細胞（CFU- CM）早期紅系祖細胞（CFU- E）和晚期紅系祖細胞（BFU- E）的增殖和分化，可輕度升高小鼠外周血象中的白細胞數(shù)，但對紅細胞和血紅蛋白數(shù)目沒有明顯的影響。地黃多糖能刺激正常小鼠和快速老化模型小鼠骨髓CFU- S、CFU- CM、CFU- E和BFU- E的增殖和分化，升高外周白細胞，具有促進造血功能的作用。體外對環(huán)磷酰胺作用后的小鼠骨髓粒系祖細胞有促進其恢復作用，并對放射性損傷具有保護和促進其恢復的作用。 3.抗衰老作用。苗明三等[14]通過實驗測定了熟地黃多糖對衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX 的影響。實驗結(jié)果顯示，熟地黃多糖可顯著提高衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX活力，降低肝腦勻漿LPO水平，具有抗衰老作用，揭示了熟地黃補益抗衰老的機理。 4.降血糖作用。張汝學等[15]經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，將地黃低聚糖灌胃給藥法給藥，給藥劑量為100 mg/kg，給藥15d時，可明顯降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖值，可使葡萄糖或腎上腺素性高血糖大鼠血糖值部分下降，并回到正常水平，但對腎上腺切除大鼠葡萄糖性高血糖無明顯影響，說明其降血糖作用與腎上腺功能有關(guān)。 5.中樞抑制作用。崔豪等[16]通過小鼠自發(fā)活動實驗、抗驚厥實驗、鎮(zhèn)靜催眠實驗觀察熟地黃及其多糖對中樞的抑制作用。研究結(jié)果表明，熟地黃煎液、熟地黃多糖對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。 6.抗突變活性。梁穎等[17]采用小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗、小鼠骨髓細胞染色體畸變實驗、小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換實驗方法評價熟地黃多糖的抗突變作用。 另外，關(guān)于地黃的提取液的功效研究還有提高對小鼠游泳抗疲勞能力、明顯清除自由基的作用[18]和對心腦血管的作用[19]等。由綜上可知，地黃多糖的功效日益為人們所知。結(jié)合現(xiàn)今研究內(nèi)容，加之我團隊組員的專業(yè)及興趣，我們將研究主題定為地黃多糖，在地黃多糖原有的藥理功效基礎上開辟比較具有應用價值與經(jīng)濟效益的新功效。 二、關(guān)于地黃多糖美容養(yǎng)顏作用的市場前景調(diào)查首先感謝各位朋友的協(xié)助。本調(diào)查的目的在于了解地黃在美容護膚產(chǎn)品中的使用情況，以期對這一市場的發(fā)展前景作出初步預測。耽誤您寶貴的時間，再次向您致謝。請您就以下問題在您認為合適的地方打“√” 1.您使用護膚產(chǎn)品是因為（未使用的回答第二題） □大家都在用 □保養(yǎng)皮膚 □其他 2.您未使用護膚產(chǎn)品是因為 □價格太高 □怕傷害皮膚 □浪費錢，沒必要 □其他 3.使用過程中，您覺得效果如何 □效果很好 □效果一般 □效果很差 4.知道關(guān)于地黃的產(chǎn)品嗎？ □知道 □了解一些 □了解極少 □不知道 5.您知道地黃在一些中藥配方中的作用嗎？ □知道 □了解一些 □了解極少 □不知道 6.您使用的護膚產(chǎn)品的成分中，含有地黃的有效成分嗎？ □有 □沒有 □沒有注意過 7.地黃具有抗衰老、抗氧化作用，有很好的護膚功效，你了解過嗎？ □知道 □了解一點 □不知道 8.如果用地黃的某些有效成分制成美容護膚品，您認為您會用嗎？ □會經(jīng)常用 □會嘗試一下 □會考慮 □不會用 9.請問您現(xiàn)在使用什么樣的護膚產(chǎn)品？ □化學制劑化妝品 □中藥化妝品 □純天然植物化妝品 10.您所使用的產(chǎn)品，您是否清楚其中的有效作用成分？ □完全清楚 □清楚一些 □不太清楚 □完全不清楚 11.假如您現(xiàn)在還未使用任何護膚產(chǎn)品，您準備 □想要用 □不太想用 □可以考慮 □以后也不用 12.假如現(xiàn)在有一款新型的含地黃有效成分的美容護膚品，您會怎樣決定？ □會大膽嘗試一下 □不太感興趣 □不會選擇去用 13.請您將您知道的護膚產(chǎn)品中所含的有效成分寫下來： 調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計與分析熟地黃是生地的炮制品，是中醫(yī)常用的補肝腎、益精血之品，具有補血滋陰、益精填髓的功效，是優(yōu)良的滋陰補血藥，被譽為“壯水之主，補血之君”，廣泛用于陰虛、血虛所致的各種疾病。多糖是地黃中有效成分之一，有資料表明，熟地黃多糖具有抗氧化、抗衰老，增強機體免疫功能等作用。為了解市場上中藥美容護膚品的行情及地黃應用于美容護膚品的研發(fā)是否有市場，特進行了相關(guān)市場調(diào)查。在調(diào)查的過程中發(fā)現(xiàn)，大家對中藥美容護膚品的了解程度，女性明顯高于男性，大部分女性基本都在使用護膚品。然而她們普遍（81.2%）認為她們的大部分美容護膚品并不是她們所期望的那樣：既經(jīng)濟實惠，又安全放心。而中藥美容護膚品的有效成分均來自純天然中藥，副作用小。所以，對于中藥美容護膚品的研發(fā)她們倍加關(guān)注。此次調(diào)查采用調(diào)查問卷和現(xiàn)場采訪問答的形式，在問卷調(diào)查當中，我們通過發(fā)放調(diào)查問卷1200份，調(diào)查的人群包括廣大網(wǎng)民、學校周圍的市民、校園里的學生等，其中網(wǎng)上調(diào)查共發(fā)放調(diào)查問卷540份，收回有效問卷501份；學校周圍市民發(fā)放調(diào)查問卷320份，收回有效調(diào)查問卷320份；校園學生發(fā)放調(diào)查問卷340份，收回有效調(diào)查問卷340份。據(jù)第四題在學生調(diào)查中的統(tǒng)計結(jié)果顯示，有60%中醫(yī)院校學生對地黃的了解已經(jīng)有了相當?shù)幕A，然而在社會當中發(fā)現(xiàn)大部分人（78.2%）對地黃的藥用功效不清楚。同時，市民和廣大學生（62.5%）對地黃護膚品的研發(fā)抱有很大期望，表示將來可以嘗試。從調(diào)查分析得出結(jié)論：地黃應用于美容護膚品研發(fā)具有很大的市場潛力。一方面，地黃應用于美容護膚品被多數(shù)人看好；另一方面，地黃中的有效成分對人體具有保健、美容養(yǎng)顏作用。而其在美容護膚品上的應用還是一項空白，所以，其研發(fā)應用具有廣闊的市場空間。 三、懷地黃多糖美容護膚作用的研究 1.實驗目的：研究懷地黃多糖的美容護膚作用 2.實驗藥品：本發(fā)明物質(zhì)（地黃多糖），SOD試劑盒、MDA試劑盒、羥脯氨酸試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。 3.實驗方法：懷地黃多糖樣品由化學實驗室提供。 3.1分組給藥取體重20-23g的雌性小鼠30只，隨機分為3組，分別灌服大、小劑量的懷地黃多糖混懸液（以0.5%CMC-Na配制成200mg/kg ，100mg/kg； 10mg/ml， 5mg/ml；0.2ml/10g）及同體積的0.5%CMC-Na，每天給藥1次，連續(xù)給藥14天。 3.2樣品制備及測定方法 3.2.1對小鼠血象水平的影響于最后1次給藥后2小時，小鼠眼眶取血，一部分全血用于測定血常規(guī)。小鼠取血后在庫爾特細胞全自動分析儀（美國Becman公司產(chǎn)品）測定小鼠血液細胞數(shù)據(jù)，結(jié)果是見表1。 3.2.2對小鼠紅細胞SOD活力的影響于最后1次給藥后2小時，小鼠眼眶取血，一部分用1%肝素抗凝?？鼓聪鄳噭┖姓f明書方法測定紅細胞SOD活力。取采集到的小鼠抗凝血50μl，沖入盛有4ml的生理鹽水的帶刻度玻璃離心管中，2000轉(zhuǎn)/分離心3分鐘。用玻璃吸管也可用針筒接上麻醉針頭吸去上清液（要吸干凈），留沉淀的紅細胞。然后在沉淀的紅細胞中加入冷蒸餾水，混勻（使紅細胞充分溶解：將溶血液對光觀看呈透明狀則已充分溶解），加入95％乙醇0.1ml，振蕩30秒，再加入三氯甲烷（氯仿）0.1ml置旋渦混勻器充分抽提一分鐘，然后3500轉(zhuǎn)/分離心8分鐘。離心后溶液分三層：上層為SOD抽提液，中層為血紅蛋白沉淀物，下層為三氯甲烷。若上清液中有混濁可加入少量固體NaCl后再離心5分鐘，即可澄清。記錄上清夜體積（本實驗上清夜體積均為0.3ml），取10μl作SOD測定。測定方法按試劑盒操作如下： 試 劑 測 定 管 對 照 管試劑一（ml） 1.0 1.0 樣品 （ml） 0.01 蒸餾水（ml） 0.01 試劑二（ml） 0.1 0.1 試劑三（ml） 0.1 0.1 試劑四（ml） 0.1 0.1 用旋渦混勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴40分鐘顯色劑（ml） 2 2 混勻，室溫放置10分鐘，于波長550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色。血紅細胞中SOD活力計算公式： 血紅細胞中SOD活力（U/gHb）= ÷50％×反應液體積 對照管吸光度 × × ÷血紅蛋白含量（gHb/ml） 3.2.3對小鼠血漿MDA水平的影響于最后1次給藥后2小時，小鼠眼眶取血，一部分用1%肝素抗凝，離心后取血漿按相應試劑盒說明書方法測定血漿MDA水平。小鼠血漿的制備：小鼠眼眶采血后，肝素抗凝，3500 rpm，離心3 min，分離血漿，4°C備用。精密吸取血漿0.2ml作為樣品，按試劑盒說明書操作測定血漿LPO水平： 標準管 標準空白管 測定管 測定空白管 10nmol/ml標準品（ml） 0.2 無水乙醇（ml） 0.2 測試樣品（ml） 0.2 0.2 試劑1（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 混勻（搖動幾下試管架）試劑2（ml） 3 3 3 3 試劑3（ml） 1 1 1 50%冰醋酸（ml） 1 旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺1小孔，95℃水?。ɑ蛴缅侀_蓋煮沸）40 min，取出后流水冷卻，然后3500 rpm，離心10 min，取上清液于532nm波長處，用1cm光徑比色杯比色，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度值。按下式計算MDA值： 3.2.4對小鼠皮膚羥脯氨酸含量的影響于第14天給藥前將小鼠背部皮膚脫毛（脫毛區(qū)面積1cm2），眼眶取血后，脫頸椎處死小鼠，取小鼠脫毛區(qū)皮膚，按相應試劑盒說明書方法測定皮膚中羥脯氨酸含量。皮膚樣本前處理：精確稱取組織濕重50mg放入試管中，準確加水解液1ml，混勻。加蓋后95℃水浴水解20分鐘（水解10分鐘混勻一次，目的是使水解更充分）。然后將各試管流水冷卻后各管加指示劑1滴，搖勻，再在各管準確加入調(diào)PH值的甲液1.0ml，混勻（此時溶液應為紅色）；之后用200μl的加樣器吸取調(diào)PH值的乙液向各管內(nèi)逐滴小心加入調(diào)PH值的乙液，每滴加入后要混勻，直至液體中指示劑的顏色變成黃綠色。此時PH值在6.0～6.8左右（約加入調(diào)PH值的乙液100μl～500μl左右）；然后加蒸餾水至10ml，混勻；取4ml稀釋的水解液加適量活性炭25mg，混勻，3500rpm離心10分鐘，小心取上清液1ml作檢測。接下來按以下表格操作： 空白管 標準管 測定管蒸餾水（ml） 1.0 5μg/ml標準應用液（ml） 1.0 檢測液（ml） 1.0 試劑一（ml） 0.5 0.5 0.5 混勻，靜置10分鐘試劑二（ml） 0.5 0.5 0.5 混勻，靜置5分鐘試劑三（ml） 0.5 0.5 0.5 計算公式： 羥脯氨酸含量 = ×標準管含量× （μg/mg濕重） (5μg/ml) 3.2.5組織樣品處理去小鼠脫毛區(qū)皮膚后，再取其胸腺、皮膚組織、肝臟、脾臟、卵巢臟器，10%甲醛固定，經(jīng)包埋、脫水、切片、染色等流程，制備相應組織切片，對切片進行病理觀察。（實驗結(jié)果由病理室提供） 4.實驗結(jié)果： 4.1對小鼠血象水平的影響 表1 地黃多糖對雌性正常小鼠血象的影響（ ±s）組別 動物數(shù)（n） 劑量（mg/kg） WBC(109/L) RBC(1012/L) HGC(g/L) PLT(109/L) 生理鹽水組 10 3.47±1.30 9.42±0.81 138.4±5.7 216.5±16.4 大劑量地黃多糖組 10 200 4.15±0.94 10.73±1.09＊＊ 141.9±5.3 295.5±18.4＊＊小劑量地黃多糖組 10 100 3.56±0.70 9.56±0.93＊＊ 144.0±7.0 246.9±31.1＊＊ **表示與生理鹽水組比P <0.01 從上表可看出，大、小劑量地黃多糖組均可顯著升高雌性小鼠血紅細胞水平（P <0.01），可顯著升高雌性小鼠血小板水平（P <0.01），也有升高血紅蛋白的趨勢。提示地黃多糖對雌性小鼠有很好的補血作用，血液生成旺盛，使氣色好利于美容。 4.2對小鼠紅細胞SOD活力、血漿MDA水平、皮膚羥脯氨酸含量的影響表2 地黃多糖對雌性小鼠血MDA、SOD及皮膚羥脯氨酸的影響（ ±s）組別 動物數(shù)(n) 劑量（mg/kg） MDA（nmol/ml） SOD（U/gHb） 皮膚羥脯氨酸（ug/mg濕重）生理鹽水組 10 52.19±6.36 36.73±2.32 1.98±0.24 大劑量地黃多糖組 10 200 15.58±8.11＊＊ 42.33±1.49＊＊ 2.29±0.31＊＊小劑量地黃多糖組 10 100 19.03±2.45＊＊ 41.27±1.74＊＊ 2.12±0.04＊＊ **表示與生理鹽水組比P <0.01 從上表可看出，大、小劑量地黃多糖組均可顯著升高雌性小鼠血超氧化物歧化酶活力和皮膚羥脯氨酸含量（P <0.01），可顯著降低血過氧化脂水平（P <0.01）。提示地黃多糖對雌性小鼠有很好的抗氧化、抗衰老作用；使皮膚中羥脯氨酸含量增高，提示皮膚膠原含量增多，抗皮膚衰老。 4.3對小鼠胸腺、脾臟組織的影響生理鹽水組實驗動物胸腺小葉分葉清、皮質(zhì)髓質(zhì)分界清楚，生理鹽水組脾臟紅白髓分界清楚，脾竇、脾小結(jié)構(gòu)正常；地黃多糖小劑量組胸腺小葉分葉清，胸腺皮質(zhì)變薄，淋巴細胞密度未改變；地黃多糖小劑量組脾臟紅白髓質(zhì)分界清，脾小葉體積明顯增大。地黃多糖大劑量組胸腺小葉分葉清，胸腺皮質(zhì)增厚，淋巴細胞密度增大；地黃多糖大劑量組脾臟紅白髓分界清，脾小結(jié)稍有增大。提示地黃多糖可促進胸腺、脾臟體積增大、淋巴細胞數(shù)增多。 表3 地黃多糖對雌性小鼠胸腺及脾臟組織形態(tài)的影響（ ±s）組別 動物數(shù)（n） 劑量（mg/kg） 胸腺皮質(zhì)（um） 淋巴細胞數(shù)（個） 脾小結(jié)大?。╱m） 淋巴細胞數(shù)（個）生理鹽水組 10 26.76±8.12 43.19±5.46 19.27±5.28 24.39±5.36 大劑量地黃多糖組 10 200 30.43±7.38 48.76±9.52＊＊ 26.17±5.12＊＊ 31.46±4.20＊＊小劑量地黃多糖組 10 100 17.56±4.26 26.53±3.16 28.23±7.34＊＊ 34.12±4.56＊＊ **表示與生理鹽水組比P <0.01，*表示與生理鹽水組比P <0.05 從上表可看出，大劑量地黃多糖組可明顯升高雌性小鼠胸腺淋巴細胞數(shù)（P <0.05），有增加胸腺皮質(zhì)厚度的趨勢；大、小劑量地黃多糖組均可使脾小結(jié)顯著增大、脾小結(jié)淋巴細胞數(shù)顯著增多（P <0.01）。提示地黃多糖對雌性小鼠有好的促進免疫器官的發(fā)育、提高機體免疫功能、抗衰老作用。 4.4對小鼠肝臟組織的影響生理鹽水組肝臟、肝小葉、肝細胞及肝細胞索、肝竇均正常；地黃多糖小劑量組肝小葉、肝細胞及肝細胞索、肝竇均正常；地黃多糖大劑量組肝小葉、肝細胞索、肝細胞、肝竇均正常。提示地黃多糖可增強肝細胞增生分裂的作用。 表4 地黃多糖對雌性小鼠肝細胞增生分裂的影響（ ±s）組別 動物數(shù)（n） 劑量（mg/kg） 0～3 4～5 6～7 8～9 生理鹽水組 10 0 4 5 1 大劑量地黃多糖組 10 200 0 1 2 7 小劑量地黃多糖組 10 100 4 6 0 0 經(jīng)Ridit檢驗，與生理鹽水組比，大劑量地黃多糖組可明顯促進雌性小鼠肝細胞增生分裂（P<0.05），小劑量地黃多糖組可顯著促進雌性小鼠肝細胞增生分裂（P<0.05）；提示地黃多糖促進機體細胞增生、使機體代謝旺盛。 4.5對小鼠皮膚組織的影響生理鹽水組皮膚的上皮層、皮下組織、腺體、肌層均正常；地黃多糖小劑量組皮膚上皮、皮下腺體增大，腺細胞增多；地黃多糖大劑量組上皮、皮下腺體部分增大，細胞增多。提示地黃多糖可促進皮膚腺體細胞增生的作用。 表5 地黃多糖對雌性小鼠皮下腺增生的影響（ ±s）組別 動物數(shù)（n） 劑量（mg/kg） 1～5 6～10 11～15 16～20 生理鹽水組 10 10 0 0 0 大劑量地黃多糖組 10 200 2 2 6 0 小劑量地黃多糖組 10 100 6 4 6 0 經(jīng)Ridit檢驗，與生理鹽水組比，小劑量地黃多糖組可顯著促進雌性小鼠皮下腺的增生（P<0.01），大劑量地黃多糖組有促進雌性小鼠皮下腺增生的趨勢；提示地黃多糖有促進皮膚腺體細胞的生成、促進皮下腺的生成，有利于皮膚的美容。 4.6對小鼠卵巢組織的影響生理鹽水組卵巢的各級卵泡及黃體均正常；地黃多糖小劑量組卵巢各級卵泡、黃體均正常；大劑量組卵巢各級卵泡、黃體均正常。 表6 地黃多糖對雌性小鼠卵巢組織形態(tài)的影響（ ±s）組別 動物數(shù)（n） 劑量（mg/kg） 卵巢卵泡個數(shù) 卵巢黃體個數(shù) 比值生理鹽水組 10 17.25±10.30 2.50±0.50 0.145 大劑量地黃多糖組 10 200 22.33±11.43 2.33±2.72 0.104 小劑量地黃多糖組 10 100 29.00±2.38 1.00±0.01 0.035 通過卵泡個數(shù)與黃體個數(shù)比值，可以看出，比值越小說明雌激素分泌越強，反之，比值越大，雌激素分泌減少。從上表可看出，地黃多糖有一定促進雌激素分泌作用；使卵巢卵泡數(shù)增加，雌激素功能增強，有利于美容。 5.實驗討論： (1) 中醫(yī)理論認為：血液運行全身，內(nèi)至五臟六腑，外達皮毛肋骨，血液對各臟腑組織器官起著營養(yǎng)和滋潤的作用。如：“肝受血而能視，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能攝。”皮膚是人體器官的重要組成部分，皮膚同樣需要血液的營養(yǎng)。因此我們說：血液才是營養(yǎng)健美肌膚的真正源泉。事實上，沒有任何一種化妝品，能像血液一樣供給肌膚細胞可以直接吸收和利用的全營養(yǎng)素、各種維生素、結(jié)合態(tài)的氧、源源不斷的水分、各種微量元素、生長因子、抗體及幾千種活性酶。同時血液還將對人體有害的二氧化碳、乳酸等代謝產(chǎn)物帶走。肌膚細胞就是通過血液的營養(yǎng)來維持其正常的生理功能，進行正常的新陳代謝，此時肌膚細胞才會健康、潔凈，變得充盈飽滿，富有生機活力而呈現(xiàn)健康之美。然而，若是血液虛虧，皮膚就會松弛，就會出現(xiàn)干燥，失去光澤、彈性。而血液的充盈，在現(xiàn)代醫(yī)學則體現(xiàn)在血象（血細胞形態(tài)、數(shù)量、比例和血紅蛋白含量的測定稱為血象）水平上。血象水平高，則血液生成旺盛：反之亦然。從上述實驗結(jié)果可以看出：大、小劑量地黃多糖組均可顯著升高雌性小鼠血紅細胞水平、血小板水平，且血紅蛋白含量也有升高的趨勢。故可認為，地黃多糖對小鼠有很好的促進血液生成作用。而于人體來說，地黃多糖則有一定的護膚美容作用。 (2)機體的衰老與體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生與積累密切相關(guān)，年齡的增長和某些體外因素會造成機體和皮膚組織自由基產(chǎn)生超過機體正常清除自由基的能力，而超氧化物歧化酶（SOD）可清除人體內(nèi)過多的有害的氧自由基，因而可以延緩衰老。過氧化脂質(zhì)，如丙二醛（MDA），是不飽和脂肪酸經(jīng)自由基作用所形成的過氧化物。過氧化脂質(zhì)和氧自由基有破壞生物膜、核糖核酸和脫氧核糖核酸的作用，超氧化物歧化酶與其及氧自由基等指標和衰老有關(guān)。超氧化物歧化酶活性越高，其清除自由基的能力越強，過氧化脂質(zhì)水平越低，則人體的抗衰老能力越強。上述結(jié)果表明：大、小劑量地黃多糖組均可顯著升高雌性小鼠超氧化物歧化酶活性，降低血過氧化水平。故可認為地黃多糖對小鼠有很好的抗氧化、抗衰老作用。而這對于人體來說，在一定程度上，結(jié)果也是肯定的。（3）羥脯氨酸是膠原蛋白特有的氨基酸之一，在真皮內(nèi)含量豐富且比較穩(wěn)定，它的含量可以間接反映真皮內(nèi)膠原蛋白含量的變化，而膠原蛋白的含量可以提示皮膚的衰老程度。按照交聯(lián)理論，當人體衰老時，脯氨酰羥化酶活性降低，引起脯氨酸羥化作用下降，導致羥脯氨酸含量降低，進而影響膠原蛋白的合成，使真皮變薄，這會降低人體皮膚的質(zhì)量。膠原蛋白被稱為“骨中之骨，膚中之膚，肉中之肉”。在人體皮膚成分中，有70%是由膠原蛋白所組成。而當膠原蛋白不足時，不僅皮膚及骨骼會出現(xiàn)問題，對內(nèi)臟器官也會產(chǎn)生不利影響。也就是說，膠原蛋白是維持身體正?；顒铀豢扇鄙俚闹匾煞?。同時也是使身體保持年輕、防止老化的物質(zhì)。另外，膠原蛋白還可以預防疾病，改善體質(zhì)，對美容和健康都很有幫助。由上述結(jié)果可以看到：大、小劑量地黃多糖組均可顯著升高雌性小鼠皮膚羥脯氨酸含量。這表示皮膚膠原蛋白含量增加，其抗衰老的作用增強。（4）卵泡開始發(fā)育時，只分泌少量雌激素；至月經(jīng)第7日卵泡分泌雌激素量迅速增加，于排卵前形成高峰，排卵后稍減少。約在排卵后1～2日，黃體開始分泌雌激素使血循環(huán)中雌激素又逐漸上升（注：為黃體生成素的作用）。約在排卵后7～8日黃體成熟時，形成血循環(huán)中雌激素第二高峰，此峰低于排卵前第一高峰。雌激素是一類有廣泛生物活性的類固醇化合物，其分泌可以滋潤皮膚、亮麗頭發(fā)。皮膚有許多雌激素受體，青春的煥發(fā)使皮膚飽滿、水潤、有光澤，這明顯的得益于雌激素的大量分泌。而隨著年齡的增長，雌激素的分泌會逐漸減少，且會引起皮膚的很大變化:皺紋、色斑……所以，雌激素在美容護膚方面具有重要的作用。上述實驗表明：大、小劑量地黃多糖組卵巢各級卵泡、黃體均正常。通過卵泡個數(shù)與黃體個體比值，可以看出，比值越小、雌激素越強；比值越大，雌激素分泌減少。而且，通過上述實驗結(jié)果可以看出，地黃多糖可使卵巢卵泡增加，有一定促進雌激素分泌作用。故可以認為這是地黃多糖抗衰老、美容護膚作用的體現(xiàn)。（5）皮膚指身體表面包在肌肉外面的組織，是人體最大的器官，主要承擔著保護身體、排汗、感覺冷熱和壓力的功能。皮膚覆蓋全身，它使體內(nèi)各種組織和器官免受物理性、機械性、化學性和病原微生物性的侵襲。而與抗衰老相關(guān)的腺體組織則主要是皮下腺體、腺細胞：皮下腺體越大，腺細胞越多，其分泌的皮脂越多。皮脂會在皮膚上形成一層膜，這層膜呈弱酸性，對皮膚來說是天然的面霜，具有很好的保護作用。皮脂膜有鎖住水分的作用，不使皮膚中水份流失到空氣中，這都體現(xiàn)了其良好的護膚作用。上述結(jié)果顯示，地黃多糖小劑量組皮膚上皮、皮下腺體增大，腺細胞增多;大劑量組皮膚上皮、皮下腺體部分增大，腺細胞增多。無疑，這個結(jié)果提示地黃多糖可促進皮膚腺體細胞的增生，也就是說其有相應的護膚作用。（6）關(guān)于人體的免疫功能，中醫(yī)的典籍早有論述：“正氣內(nèi)存、邪不相干”，而免疫功能會隨人類年齡的增長而衰退。人體的免疫器官包括胸腺、脾臟及淋巴結(jié)，和其它器官一樣，系統(tǒng)功能亦會隨年齡增長而衰退。最明顯的例子是胸腺，這個位于胸骨后的免疫器官，在嬰幼兒時期體積最大，其后會漸漸縮小，到六十歲時差不多完全萎縮并喪失功能。而脾臟也是如此，只是表現(xiàn)的不太明顯。所以說，只要能使人體的免疫功能維持在一定階段。就可以延緩人體衰老。由上述實驗結(jié)果可知：大、小劑量地黃多糖組均可顯著升高雌性小鼠胸腺淋巴細胞，有增加胸腺皮質(zhì)厚度的趨勢；也會使脾小結(jié)顯著增大、脾小結(jié)淋巴細胞數(shù)顯著增多。這提示地黃多糖對雌性小鼠有好的促進免疫器官的發(fā)育、提高機體免疫功能、抗衰老作用。故對于人體來說，在這些方面，則應該會產(chǎn)生相似的結(jié)果、作用。（7）肝臟的護膚作用應該說是通過谷胱甘肽的作用來體現(xiàn)的，谷胱甘肽的主要生理功能是抗自由基、抗衰老、抗氧化。機體產(chǎn)生的過多自由基會損傷生物膜，侵襲生命大分子，促進機體衰老，谷胱甘肽可消除自由基，能起到強有力的保護作用，延緩機體衰老。谷胱甘肽不僅能消除自由基還可以提高人體免疫力，谷胱甘肽在老人遲緩化細胞上所發(fā)揮的功效比年輕人大，所以對于衰老的免疫系統(tǒng)，其可維持之。谷胱甘肽在肝臟細胞中的含量相對來說是很高的，所以肝細胞數(shù)目的增加，可增強人體的抗衰老作用。上述實驗結(jié)果顯示，地黃多糖可促進體細胞的增殖，故可以說，地黃多糖可以增強機體的抗衰老作用。 6.實驗結(jié)論由上述實驗結(jié)果可知，本研究物質(zhì)可以通過提高皮膚羥脯氨酸含量，增加皮膚彈性，發(fā)揮直接的護膚作用；還可以通過升高血超氧化物歧化酶（SOD）活性、降低血過氧化脂（MDA）水平，增強機體免疫力，促進機體造血功能等發(fā)揮間接護膚作用。在對皮膚有良好的抗氧化，抗衰老的保護作用的前提下無毒副作用，是皮膚保健品制備上的新創(chuàng)造，其制備成功為地黃的開發(fā)、應用做出創(chuàng)造性貢獻，經(jīng)濟和社會效益巨大。 四、地黃多糖美容護膚產(chǎn)品的前景展望 1.產(chǎn)品背景 中國美容護膚保健品營銷市場是一個充滿活力的市場，跨國企業(yè)的大舉進入，本土企業(yè)的崛起，使這個行業(yè)更加變化多端：產(chǎn)品結(jié)構(gòu)變化，市場更加細分，概念日漸翻新，化妝品營銷也各有高招。中草藥一直普遍被認為是中藥產(chǎn)品的原材料，然而將中草藥有效成分融入護膚品當中，可以對肌膚起到獨特的功效，針對這一特點，含有中草藥成分的美容保健品應運而生。所謂的中藥美容保健品是指以中醫(yī)藥理論為指導，由中藥制成或是在化學合成物質(zhì)中添加中藥或中藥成分而成，具備清潔身體、美化外表、改變外貌、增加吸引力作用的物質(zhì)。隨著生活水平的不斷提高，人們越來越注意護膚品的環(huán)保性、安全性、天然性，所以，代表大自然的顏色——綠色，就成為“安全健康”的代名詞。而中藥美容保健品是由從中草藥及天然植物中提取的有效成分制成的保健品。中藥美容護膚品遵循自然環(huán)境和人類的可持續(xù)發(fā)展要求，滿足人們對高質(zhì)量生存方式的追求，順應人們個性化和多樣性消費的潮流和“綠色”及“人類回歸自然”的潮流?！疤烊弧薄盁o添加”的美容護膚品風潮，無疑是給了中藥美容護膚品一個實現(xiàn)飛躍發(fā)展的機遇。于是，我們的含地黃多糖的中藥美容護膚品就應運而生。 2.市場背景 在產(chǎn)品投放初期，我們將在河南市場致力于公司的發(fā)展，因此，我們將重點對河南市場進行描述。（1）人口 2008年底，河南省的總?cè)丝?918萬人，較上年的自然增長率為4.97%。全省每年出生人口近120萬，凈增約50萬人，相當于增加一個中等縣的人口。按照這樣一個增長速度，2009年河南總?cè)丝诖蠹s9970萬，到2010年下半年，我省將成為中國第一個人口超億的省份。 （2）地域交通 河南省位于全國心臟部位，優(yōu)越的交通運輸條件使河南成為全國重要的交通運輸樞紐。河南省地處全國路網(wǎng)中心，4條鐵路支線在境內(nèi)交匯，形成了縱橫交錯、四通八達的鐵路網(wǎng)。擁有亞洲最大的列車編組站和全國最大的零擔貨物轉(zhuǎn)運站，一類航空、鐵路口岸和公路二類口岸各1個，郵政電信業(yè)務量位居全國前列。便捷的地域交通將給我們公司的物流、經(jīng)營帶來極大的便利。（3）居民生活水平 剛剛過去的2010年，我省城鎮(zhèn)居民人均可支配收入突破萬元大關(guān)，達到11477.05元。國家統(tǒng)計局河南調(diào)查總隊最新調(diào)查顯示，這一數(shù)據(jù)比上年同期增長了17.0%，扣除價格因素后實際增長11.0%。分析認為，支撐我省城鎮(zhèn)居民可支配收入增長的要素主要是工薪收入、轉(zhuǎn)移性收入、財產(chǎn)性收入和個體經(jīng)營凈收入的快速穩(wěn)定增長。另外，我省居民收入穩(wěn)定增長，消費需求逐漸升溫，同時消費結(jié)構(gòu)向質(zhì)量型轉(zhuǎn)化，人均消費額為890元，增長了12%，其中醫(yī)療保健的消費比例呈明顯上升趨勢。（4）消費心理及行為 一直以來，在大家心目中，中藥都是我國人民幾千年來防病治病的工具，也是中華民族的優(yōu)秀文化遺產(chǎn)。河南是許多中草藥的故鄉(xiāng)，也是“醫(yī)圣”張仲景的故鄉(xiāng)，同時擁有一大批如宛西，羚銳等優(yōu)秀的中藥企業(yè)和河南中醫(yī)學院等專業(yè)學術(shù)科研機構(gòu)，為中醫(yī)藥市場奠定了深厚的文化底蘊，消費者從心理上對中藥的認可程度比較高，正是這優(yōu)勢才使我省中藥在經(jīng)歷歷史的沖刷后仍能延續(xù)至今并保持強盛的生命力。據(jù)省內(nèi)相關(guān)調(diào)查，總體情況下消費者傾向于選擇中藥。 3.產(chǎn)品展望 經(jīng)初步研究，懷地黃多糖制品（口服）通過降低血過氧化脂（MDA）水平、增強血超氧化物歧化酶（SOD）活力、增強機體免疫力、促進機體造血功能等內(nèi)部調(diào)理方式，從而起到美容護膚作用。還可提高皮膚羥脯氨酸含量，增加皮膚彈性，發(fā)揮直接的護膚作用。其口服內(nèi)用，可滋陰補血、增強免疫力、抗衰老，使人面色紅潤、有光澤，同時促進皮膚生發(fā)層細胞分裂增生。并且可制成多種劑型，如口服液、片劑、膠囊劑、膏劑等，目前片劑、膠囊劑以其口感好、攜帶方便而備受消費者親睞。至于懷地黃多糖制品能否外用，尚需進一步研究。地黃多糖美容產(chǎn)品依靠其良好的效果，再加上產(chǎn)品形式選擇范圍廣，可根據(jù)消費者需要設計成多種劑型，具有極好的前景。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：在懷地黃多糖原有的藥理功效的基礎上開辟比較具有應用價值與經(jīng)濟效益的新功效?；舅悸罚和ㄟ^測定地黃多糖實驗組小鼠皮膚羥脯氨酸含量、SOD活性、MDA水平，及觀察懷地黃多糖對小鼠血象、免疫器官、皮膚組織及代謝器官的影響，總結(jié)出懷地黃多糖美容護膚的功效。
科學性、先進性及獨特之處
- 羥脯氨酸是膠原蛋白特有的氨基酸之一，其含量可反映皮膚膠原蛋白含量。機體衰老與體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生與積累密切相關(guān)，SOD可清除人體內(nèi)過多有害氧自由基，因而可以延緩衰老。MDA與氧自由基等指標有關(guān)。研究血象、皮膚組織本身、免疫組織及卵巢與皮膚美容均有聯(lián)系，充分說明了本實驗的科學先進之處。在懷地黃功效的研究中，美容功效的研究目前還是空白，開辟懷地黃多糖美容功效并取得一定成效是我們實驗的獨特之處。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 實際應用價值：結(jié)合懷地黃多糖美容功效，開發(fā)出一系列懷地黃多糖的美容護膚品，有好的社會和經(jīng)濟價值?，F(xiàn)實意義：進一步闡明了懷地黃多糖的美容護膚作用，開辟了懷地黃的新功效，新用途。
學術(shù)論文摘要
- 實驗目的：研究懷地黃多糖的美容護膚作用實驗方法: 取體重20-23g的雌性小鼠30只，隨機分為3組，分別灌服大、小劑量的懷地黃多糖混懸液（以0.5%CMC-Na配制成200mg/kg ，100mg/kg； 10mg/ml， 5mg/ml；0.2ml/10g）及同體積的0.5%CMC-Na，每天給藥1次，連續(xù)給藥14天，于第14天給藥前將小鼠背部皮膚脫毛（脫毛區(qū)面積1cm2），于最后1次給藥后2小時，小鼠眼眶取血，一部分全血用于測定血常規(guī)，另一部分用1%肝素抗凝。抗凝血按相應試劑盒說明書方法測定紅細胞SOD活力，離心后取血漿按相應試劑盒說明書方法測定血漿MDA水平；然后脫頸椎處死小鼠，取小鼠脫毛區(qū)皮膚，按相應試劑盒說明書方法測定皮膚中羥脯氨酸含量。再取其胸腺、皮膚組織、肝臟、脾臟、卵巢臟器，10%甲醛固定，經(jīng)包埋、脫水、切片、染色等流程，制備相應組織切片，對切片進行病理觀察。實驗結(jié)論:由上述實驗結(jié)果可知，本研究物質(zhì)可以通過提高皮膚羥脯氨酸含量，升高SOD活性、降低MDA水平，增強機體免疫力，促進機體造血功能等發(fā)揮美容護膚作用。
獲獎情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻
- ［1］ 李紅霞,許閔,孟江,等. 懷地黃多糖的含量測定[ J ] . 河南科學,2002 ,20 (2) :144 - 146. ［2］陳力真，馮杏婉，顧國民，等.地黃免疫抑瘤活性成分的分離提取與藥理作用［J］.中國中藥雜志，1993，18（8）：502- 505. ［3］ Tomoda M ,Kato S ,OnumaM. Water - soluble constituent s of Re2hmanniae Radix. I. Carbohydrates and acids of Rehmannia gluti2nosa f . hueichingensis[J ] . Chem Pharm Bull ,1971 ,19 (7) :1455 -1460. ［4］ 李計萍,馬華,王躍生,等. 鮮地黃與干地黃中梓醇、糖類成分含量的比較[J ] . 中國藥學雜志,2001 ,32 (5) :300 - 302. ［5］陳力真，馮杏婉，周金黃，等.地黃多糖b 的免疫抑瘤作用及其機理［J］.中國藥理學與毒理學雜志，1993，7（2）153- 156. ［6］苗明三，孫艷紅，方曉艷. 熟地黃多糖抗氧化作用［J］. 中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9（10）：32- 33.
同類課題研究水平概述
- 1. 增強免疫功能和抗腫瘤作用。陳力真等用地黃多糖α和地黃多糖β進行實驗，觀察對小鼠T淋巴細胞增殖的影響以及對接種S180瘤細胞小鼠瘤體重量的影響，發(fā)現(xiàn)地黃多糖β是地黃中兼具免疫與抑瘤活性的有效成分。進一步研究發(fā)現(xiàn)，地黃多糖β可以顯著提高小鼠脾臟T淋巴細胞的分泌能力。同時系統(tǒng)研究了抑瘤作用的機理，用含有地黃多糖β的培養(yǎng)液培養(yǎng)S180細胞和HL60細胞，在24h和48h時觀察瘤細胞的生長情況。結(jié)果表明，地黃多糖β沒有直接殺傷瘤株細胞的作用，抑瘤作用與其調(diào)動和增強T淋巴細胞的功能密切相關(guān)。 2.對造血功能的影響。劉福君等經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，地黃多糖可明顯促進正常小鼠骨髓造血干細胞（CFU- S）、粒單系祖細胞（CFU- CM）早期紅系祖細胞（CFU- E）和晚期紅系祖細胞（BFU- E）的增殖和分化，可輕度升高小鼠外周血象中的白細胞數(shù)，但對紅細胞和血紅蛋白數(shù)目沒有明顯的影響。地黃多糖能刺激正常小鼠和快速老化模型小鼠骨髓CFU- S、CFU- CM、CFU- E和BFU- E的增殖和分化，升高外周白細胞，具有促進造血功能的作用。體外對環(huán)磷酰胺作用后的小鼠骨髓粒系祖細胞有促進其恢復作用，并對放射性損傷具有保護和促進其恢復的作用。 3.抗衰老作用。苗明三等通過實驗測定了熟地黃多糖對衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX 的影響。實驗結(jié)果顯示，熟地黃多糖可顯著提高衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX活力，降低肝腦勻漿LPO水平，具有抗衰老作用，揭示了熟地黃補益抗衰老的機理。 4.降血糖作用。張汝學等經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，將地黃低聚糖灌胃給藥法給藥，給藥劑量為100 mg/kg，給藥15d時，可明顯降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖值，可使葡萄糖或腎上腺素性高血糖大鼠血糖值部分下降，并回到正常水平，但對腎上腺切除大鼠葡萄糖性高血糖無明顯影響，說明其降血糖作用與腎上腺功能有關(guān)。 5.中樞抑制作用。崔豪等通過小鼠自發(fā)活動實驗、抗驚厥實驗、鎮(zhèn)靜催眠實驗觀察熟地黃及其多糖對中樞的抑制作用。研究結(jié)果表明，熟地黃煎液、熟地黃多糖對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。 6.抗突變活性。梁穎等采用小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗、小鼠骨髓細胞染色體畸變實驗、小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換實驗方法評價熟地黃多糖的抗突變作用。
