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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- SDF-1α、c-MYC 蛋白調(diào)控速激肽受體-1-截短型mRNA表達(dá)的研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 通過構(gòu)建c-myc基因shRNA表達(dá)載體；用小干擾RNA方法沉默乳腺癌細(xì)胞MCF-7的c-myc基因，分成兩組，相關(guān)實(shí)驗(yàn)組加SDF-1α細(xì)胞因子中和抗體，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測TACR1截短型受體（TACR1-Tr）mRNA表達(dá)水平，得出最終結(jié)論MCF-7細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下，c-MYC蛋白可以反式激活TACR1-Tr的轉(zhuǎn)錄；但加入SDF-1α因子中和抗體后， c-MYC蛋白失去了這種激活作用。
- 詳細(xì)介紹：
- 目的：觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC 蛋白對速激肽受體-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated，TACR1-Tr，）轉(zhuǎn)錄水平的影響。方法：構(gòu)建-myc基因shRNA表達(dá)載體；用小干擾RNA方法沉默乳腺癌細(xì)胞MCF-7的c-myc基因，分成c-myc+ 細(xì)胞組和c-myc- 細(xì)胞組，相關(guān)實(shí)驗(yàn)組加SDF-1α細(xì)胞因子中和抗體，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測TACR1截短型受體（TACR1-Tr）mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：c-myc 基因shRNA 表達(dá)載體構(gòu)建成功；在正常培養(yǎng)條件下，c-myc-細(xì)胞組的TACR1-Tr轉(zhuǎn)錄水平低于c-myc+細(xì)胞組（P<0.05）；加了SDF-1α中和抗體后，c-myc-組TACR1-Tr的mRNA表達(dá)水平高于c-myc+組（P<0.05）。結(jié)論：MCF-7細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下，c-MYC蛋白可以反式激活TACR1-Tr的轉(zhuǎn)錄；但加入SDF-1α因子中和抗體后， c-MYC蛋白失去了這種激活作用。
作品圖片
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC 蛋白對速激肽受體-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated，TACR1-Tr）轉(zhuǎn)錄水平的影響。試圖揭示乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 根據(jù)研究結(jié)果，我們推論c-MYC蛋白對TACR1-Tr的轉(zhuǎn)錄有調(diào)控效應(yīng)，這種調(diào)控很有可能受到細(xì)胞因子SDF-1α的影響。此結(jié)果為進(jìn)一步探討相關(guān)機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，目前未見相關(guān)報(bào)道。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 作品為探討乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)機(jī)制提供了新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，如能在此方面深入開展研究并得到臨床證實(shí)，將為日后可能的靶向治療藥物的研發(fā)及生物治療提供理論基礎(chǔ)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC 蛋白對速激肽受體-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated，TACR1-Tr）轉(zhuǎn)錄水平的影響。 方法：構(gòu)建c-myc基因shRNA表達(dá)載體；用小干擾RNA方法沉默乳腺癌細(xì)胞MCF-7的c-myc基因，分成c-myc+ 細(xì)胞組和c-myc- 細(xì)胞組，相關(guān)實(shí)驗(yàn)組加SDF-1α細(xì)胞因子中和抗體，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測TACR1截短型受體（TACR1-Tr）mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：c-myc 基因shRNA 表達(dá)載體構(gòu)建成功；在正常培養(yǎng)條件下，c-myc-細(xì)胞組的TACR1-Tr轉(zhuǎn)錄水平低于c-myc+細(xì)胞組（P<0.05）；加了SDF-1α中和抗體后，c-myc-組TACR1-Tr的mRNA表達(dá)水平高于c-myc+組（P<0.05）。 結(jié)論：MCF-7細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下，c-MYC蛋白可以反式激活TACR1-Tr的轉(zhuǎn)錄；但加入SDF-1α因子中和抗體后， c-MYC蛋白失去了這種激活作用。
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- [1] Pennefather JN, Lecci A, Candenas ML,et al. Tachykinins and tachykinin receptors: a growing family. Life Sci 2004;74:1445–563 [13] Dang CV, c-Myc target genes involved in cell growth, apoptosis, and metabolism. Molecular and Cellular Biology. Mol Cell Biol. 1999 Jan;19(1):1-11 （共20條，因?yàn)樽謹(jǐn)?shù)要求，僅節(jié)選兩條）
同類課題研究水平概述
- 前速激肽原PPT-I 是高度保守的單拷貝基因，通過替換剪切和轉(zhuǎn)錄后修飾產(chǎn)生幾個(gè)屬于速激肽家族的肽，如P物質(zhì)和神經(jīng)激肽A等，并以不同的親和性結(jié)合三種受體 [1]。PPT-I 肽與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)有關(guān)聯(lián)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和一些腫瘤組織呈構(gòu)成性表達(dá)，也有研究發(fā)現(xiàn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)PPT-I肽，調(diào)節(jié)骨髓造血活動(dòng)[2-4]，其中P物質(zhì)和神經(jīng)激肽A等作為中間遞質(zhì)參與機(jī)體多個(gè)器官功能活動(dòng)[5,6]，在PPT-I 肽各類受體中，速激肽受體1在乳腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移過程中扮演極為重要的角色，TACR1分為全長型和截短型兩種受體，屬于G蛋白偶聯(lián)7次跨膜受體。在乳腺癌細(xì)胞中，PPT-I基因過表達(dá)常導(dǎo)致TACR1-Tr以及幾個(gè)相應(yīng)的細(xì)胞因子產(chǎn)生，而在正常乳腺上皮細(xì)胞TACR1-Tr 表達(dá)量低，甚至難以檢測，而TACR1-Fl表達(dá)量比較高，在惡性度比較高的乳腺癌細(xì)胞, 情況剛好相反，TACR1-Tr 受體表達(dá)上調(diào)是乳腺癌細(xì)胞獲得侵襲性的特征之一，尤其是獲得骨轉(zhuǎn)移特性[7-9]。 SDF-1α又稱CXCL12或前B細(xì)胞刺激因子，與趨化因子受體4形成CXCL12-CXCR4生物學(xué)軸，通過細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)作用，調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄蛋白，同樣也調(diào)節(jié)TACR1受體表達(dá)[10],我們前期實(shí)驗(yàn)也表明SDF-1α表達(dá)水平與TACR1-Tr轉(zhuǎn)錄水平成負(fù)相關(guān)。 許多腫瘤的發(fā)生都與c-myc基因的過度表達(dá)和擴(kuò)增有關(guān)，在一部分乳腺癌病例中c-myc都存在過表達(dá)[11-13]。c-myc基因位于8q24，c-MYC蛋白有三個(gè)亞型[14-16] ，其中最主要的是c-MYC2, 其羧基端含有螺旋-環(huán)-螺旋-亮氨酸拉鏈模序結(jié)構(gòu)，這一模序結(jié)構(gòu)與DNA結(jié)合有關(guān)，c-MYC2與轉(zhuǎn)錄因子MAX結(jié)合形成二聚體，然后與E盒結(jié)合，c-MYC2 氨基端發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。c-MYC蛋白可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增值、分化、凋亡等，在細(xì)胞周期中起著很重要的作用，尤其是誘導(dǎo)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白 E-CDK2，可以調(diào)控細(xì)胞進(jìn)入S期 [17-19]，所以c-MYC 蛋白在不同的條件下所表現(xiàn)的功能千差萬別。由于以前的研究沒有回答c-MYC蛋白如何影響TACR1基因的轉(zhuǎn)錄，以及細(xì)胞因子SDF-1α是否影響c-MYC蛋白的調(diào)控效應(yīng)。本研究試圖用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建c-myc-和c-myc+ 細(xì)胞，觀察c-MYC蛋白和細(xì)胞因子SDF-1α如何影響TACR1-Tr的轉(zhuǎn)錄。
