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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 黃河裸裂尻生長激素基因的PCR擴(kuò)增和克隆
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 1、總RNA的提取 2、反轉(zhuǎn)錄RT-PCR 3、PCR擴(kuò)增 4、T-載體連接 5、JM-109轉(zhuǎn)染 6、大腸桿菌培養(yǎng)及其目的基因表達(dá)。
- 詳細(xì)介紹：
- 從黃河裸裂尻魚腦組織中提取總RNA，通過反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增得到其生長激素基因，然后利用基因工程技術(shù)將其目的基因?qū)胧荏w大腸桿菌中進(jìn)行高效表達(dá)，獲得較高純度的表達(dá)蛋白。 通過實(shí)驗(yàn)，首次克隆得到黃河裸裂尻生長激素基因，同時(shí)也和幾種高原魚種做了比對(duì)，做出了相應(yīng)的系統(tǒng)進(jìn)化分析。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 從黃河裸裂尻魚腦組織中提取總RNA，通過反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增得到其生長激素基因，然后利用基因工程技術(shù)將其目的基因?qū)胧荏w大腸桿菌中進(jìn)行高效表達(dá)，獲得較高純度的表達(dá)蛋白，這對(duì)在黃河裸裂尻魚的飼料中添加適量的生長激素蛋白提高其養(yǎng)殖生產(chǎn)率提供了基礎(chǔ)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 1、擴(kuò)增出了黃河裸裂尻魚生長激素基因片段（508bp）; 2、分析了黃河裸裂尻魚與其他魚類的同緣性和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系； 3、通過基因工程技術(shù)將其目的基因成功的導(dǎo)入到了受體大腸桿菌中并得到了表達(dá)。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 1、為在黃河裸裂尻魚的飼料中添加適量的生長激素蛋白提高其養(yǎng)殖生產(chǎn)率提供了基礎(chǔ)； 2、對(duì)我省開展的高原特有魚種的人工馴化和養(yǎng)殖計(jì)劃（省漁業(yè)環(huán)境監(jiān)測站實(shí)施中）提供了有力的技術(shù)保障； 3、對(duì)青藏高原其它裂鰒魚亞科的魚種比如：青海湖裸鯉、花斑裸鯉等有重要的借鑒效果。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 從黃河裸裂尻魚的腦組織提取總RNA，應(yīng)用RT-PCR方法獲得生長激素cDNA。將cDNA 插入質(zhì)粒 pQE30中,并使其在大腸桿菌 RB791 中表達(dá)。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE 電泳檢測蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明：擴(kuò)增后黃河裸裂尻生長激素基因?yàn)?08bp。由序列的比對(duì)，黃河裸裂尻生長激素基因與青海湖裸鯉的的同源性很高。電泳結(jié)果顯示一新的分子量約為14. 4 kD的特異蛋白帶。
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- [1]謝保勝，藤原滋樹，斑馬魚總RNA提取和純化[J].生物學(xué)雜志，2007,24（6）：67-69 [2]謝保勝，段瑞君，藤原滋樹，斑馬魚促性腺激素釋放激素基因的克隆與表達(dá)[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，30（1）：9-13 [3]謝保勝，段瑞君，斑馬魚促性腺激素釋放激素及相關(guān)肽基因的克隆與序列分析[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2009,18（3）263-267 [4] Hew C L, et al. Molecular cloning and expression of salmon pititray hormone. Fish Physiology and Biochemistry, 1989, 7: 375 [5]Fu C, et al. Growth and utilization by human growth hormone transgenic carp fed diets with different protein levels. Journal of Fish Biology, 1998, 53: 115 [6] Kawata Y, et al.Expression of salmon growth hormone in the cyanobacterium Agmenellum quadruplicatum .Biotechnology Letters, 1991, 13: 851 [7] Mclean E, et al. Growth acceleration of coho salmon( Uncorhynchus kisutch ) following oral administration of recombinant bovine somatotropin. Aquaculture. 1990, 99: 197 [9]劉濱，臧曉南，劉順梅，張學(xué)成，雷霽霖大菱鲆生長激素基因cDNA的克隆、序列分析及分子系統(tǒng)研究[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2008,38（5）：726-732 [9]江世貴，張殿昌，鯪生長激素基因cDNA的分子克隆和序列分析[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2003，VOL.10 NO.2
同類課題研究水平概述
- 美國T. T. Chen等使用紅鱒魚的生長激素基因cDNA片段構(gòu)建轉(zhuǎn)基因鯉魚。國外利用基因工程菌表達(dá)的虹鱒魚生長激素通過腹腔注射或滲透沖擊以促進(jìn)虹鱒魚的生長。 Hew等1989 實(shí)驗(yàn)室完成鮭魚垂體激素的分子克隆和表達(dá)； Fu等 1998用人生長素基因改造的鯉魚后進(jìn)行不同蛋白水平飼喂實(shí)驗(yàn)。Kawata等成功運(yùn)用鮭魚生長素基因在藻青菌中的表達(dá)。Mclean等 1990也做了銀大馬哈魚飼喂重組牛生長對(duì)其生長的實(shí)驗(yàn)，獲得成功。Chen 2000等在六須鲇魚通過飼喂含有重組生長激素的酵母對(duì)其生長的影響。Moriyama等在虹鱒魚和擬鯉飼喂重組鮭魚的生長激素發(fā)現(xiàn)有明顯促生長作用。近幾年來,國外陸續(xù)有一些魚類生長激素cDNA和全長基因的序列報(bào)道，如尖齒胡子鲇、河鲇、芒鲇、巨鲇、越南鲇、印度鲇，同時(shí)也有些基因在原核生物中表達(dá)成功，并且在生產(chǎn)實(shí)際中得以運(yùn)用。中國國家海洋局從1992年開始，在國內(nèi)率先從鱸魚等3種海水魚中提取、分離到魚生長激素基因。在進(jìn)行專門的發(fā)酵培養(yǎng)后，很快獲得了大量魚生長激素。將這些激素引入魚苗體內(nèi)后，這些基因魚苗和平常的魚苗相比，體重可增加35％～135％。中國科學(xué)院上海生物工程研究中心從九十年代中期開始將基因工程鏈魚生長激素應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的研究。通過從鏈魚的腦垂體中分離出生長激素cDNA片段,構(gòu)建鏈魚生長激素基因表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)行了高效表達(dá)。經(jīng)過純化，獲得純度達(dá)80%以上的產(chǎn)品，能滿足用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的質(zhì)量要求。并以此為主要成分開發(fā)出了不同配方的促長素系列產(chǎn)品。東海水產(chǎn)研究所和蘇州市華夏甲魚-養(yǎng)殖技術(shù)研究所對(duì)上述促長素產(chǎn)品進(jìn)行測試,通過浸泡處理和餌料飼喂的方法對(duì)觀賞魚、河蟹、羅氏沼蝦、鱖魚、青蝦、南美白對(duì)蝦、異育銀鯽等水產(chǎn)品養(yǎng)殖的促生長試驗(yàn)表明：基因工程魚生長激素對(duì)上述水產(chǎn)品體重和體長的提高顯著。在相同的飼養(yǎng)時(shí)間段內(nèi)平均增重10%以上,這一結(jié)果達(dá)到了國內(nèi)領(lǐng)先水平。 目前我省在漁業(yè)生產(chǎn)中未見該領(lǐng)域的研究報(bào)道，特別是對(duì)青藏高原特有的裂鰒魚亞科的魚種通過生物工程的方法提高其生產(chǎn)性能的更是空白。
