基本信息
- 項目名稱：
- RAGE與SLP76相互作用的分子機制
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 本研究采用基因克隆、Co-IP、Western blot、LiquiChip液相芯片系統(tǒng)等技術揭示了RAGE和SLP76以刺激和時間依賴的方式存在相互作用，篩選出SLP76上145Y，173Y，207S及SAM結構域可能參與這一過程；并初步證實RAGE和SLP76相互作用影響細胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調節(jié)MIP-1α和TNF-α等細胞因子的分泌。
- 詳細介紹：
- RAGE屬于免疫球蛋白超家族分子，是一種模式識別的多配體受體，與AGEs、HMGB1、S100家族等配體分子作用，可發(fā)揮非常豐富的生物學功能。近年來，RAGE的研究取得了很大的進展，然而，對其如何將胞外信號傳遞至胞內(nèi)信號分子的機制卻尚不明了。前期研究發(fā)現(xiàn)，SLP76是通過噬菌體展示技術篩選出來的最有可能與RAGE結合的分子。本研究擬探討RAGE與SLP76相互作用的分子機制。 我們的研究采用基因克隆、Co-IP、Western blot、高通量的LiquiChip液相芯片系統(tǒng)對具體的作用機制進行了探討，首次證實，RAGE和SLP76以刺激和時間依賴的方式存在相互作用，并篩選出SLP76上可能參與這一過程的結構域，即第145位酪氨酸，173位酪氨酸，207位絲氨酸及SAM結構域；此外，并初步證實RAGE和SLP76相互作用影響細胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調節(jié)MIP-1α和TNF-α等細胞因子的分泌。這為進一步認識RAGE介導的炎癥反應提供了有益的理論。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- RAGE信號通路激活可以導致炎癥發(fā)生，在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，然而其向胞內(nèi)傳遞信號的始動環(huán)節(jié)卻尚不清楚。前期研究通過噬菌體展示技術發(fā)現(xiàn)，SLP76可與RAGE相互作用向下游傳遞信號。基于以上認識，本研究采用基因克隆、Co-IP、Western blot、LiquiChip液相芯片系統(tǒng)等技術，主要探討RAGE與SLP76相互作用的分子機制及其相關的生物學效應。
科學性、先進性及獨特之處
- 首次發(fā)現(xiàn)，AGEs刺激下RAGE和SLP76以時間依賴方式存在相互作用，其中SLP76的145Y，173Y，207S及SAM結構域可能參與這一過程；并初步證實RAGE和SLP76相互作用影響細胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調節(jié)MIP-1α和TNF-α等細胞因子的分泌。為探索SLP76各結構域在RAGE通路中的作用奠定了基礎，也為認識RAGE誘導的炎癥反應提供了新思路。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 本研究揭示了RAGE與SLP76相互作用的分子機制，為認識RAGE誘導的炎癥反應提供了有力的理論依據(jù)；同時也可能為糖尿病血管并發(fā)癥、動脈粥樣硬化等炎癥反應性疾病的臨床治療提供新的治療靶點。
學術論文摘要
- 目的：探討SLP76在RAGE介導的信號通路中作用的分子機制。方法：分別進行體外和體內(nèi)結合實驗證明RAGE與SLP76能相互作用；構建SLP76的突變體，Co-IP檢測其各結構域及磷酸化位點的功能；免疫印記法檢測AGEs刺激后下游信號通路的激活。Liqui-Chip液相蛋白芯片系統(tǒng)檢測AGEs刺激誘導細胞因子表達譜的改變。結果：體外和體內(nèi)實驗均證實RAGE和SLP76存在相互作用，并具有刺激依賴性；Co-IP結果表明，SLP76的145Y，173Y，207S及SAM結構域突變體不能與RAGE結合；100ng/ml AGEs刺激RAW264.7 激活了ERK、 p38和NF-κB，進而導致MIP-1α和TNF-α分泌水平發(fā)生改變；SLP76能夠影響RAGE介導的ERK活化。結論：在AGEs刺激下RAGE和SLP76以時間依賴性方式存在相互作用，其中SLP76的145Y，173Y，207S及SAM結構域可能參與這一過程；并初步證實RAGE和SLP76相互作用影響細胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調節(jié)MIP-1α和TNF-α等細胞因子的分泌。
獲獎情況
- 尚未發(fā)表。
鑒定結果
- 該實驗設計合理，方法科學，結果可靠，處同類研究領先水平。
參考文獻
- 基因克隆、Co-IP、Western blot、LiquiChip液相芯片系統(tǒng)
同類課題研究水平概述
- RAGE屬于免疫球蛋白超家族分子，是一種模式識別的多配體受體，與AGEs、HMGB1、S100家族等配體分子作用，可發(fā)揮非常豐富的生物學功能，包括蛋白質磷酸化、細胞骨架改變、炎癥反應以及細胞生長分化等，其廣泛表達于多種細胞表面，在動脈粥樣硬化、腫瘤、阿爾茲海默病以及糖尿病血管病變等一系列疾病中發(fā)揮了非同尋常的作用。RAGE與其配體作用介導的信號轉導通路一直是科學家們關注的熱點。近來，更是發(fā)現(xiàn)了一些新的配體分子如淀粉樣β肽、S100A8/A9等，同時，RAGE分子本身也發(fā)現(xiàn)了多種亞型成分，這些都極大地豐富了人們對RAGE的認識。 然而，RAGE胞內(nèi)段向下游傳遞信號的分子機制卻尚不明了。前期研究發(fā)現(xiàn)，SLP76是通過噬菌體展示技術篩選出來的最有可能與RAGE相互作用的分子。有文獻報道，SLP76和RAGE存在共同表達的細胞載體即單核巨噬細胞系統(tǒng)，這是兩者相互作用的客觀條件。并且，SLP76作為一種銜接蛋白，可與其他蛋白形成信號復合物，在TCR信號轉導通路中的發(fā)揮極其重要的作用，已被人廣為接受。這為SLP76在RAGE介導的信號通路的發(fā)揮作用創(chuàng)造了可能性。這些研究提示RAGE與SLP76可能存在相互作用，并發(fā)揮一定的生物學效應。 我們的研究首次證實了，RAGE和SLP76以刺激和時間依賴的方式存在相互作用，并篩選出SLP76上可能參與這一過程的結構域，即第145位酪氨酸，173位酪氨酸，207位絲氨酸及SAM結構域；此外，并初步證實RAGE和SLP76相互作用影響細胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調節(jié)MIP-1α和TNF-α等細胞因子的分泌。這為下一步SLP76各結構域在RAGE通路中的作用奠定了基礎，同時也為進一步認識RAGE介導的炎癥反應提供了有益的理論。
