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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 三葉因子家族在大鼠頜下腺和舌下腺的定位
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 采用免疫組化、原位雜交和RT-PCR檢測(cè)TFFs基因和多肽在大鼠頜下腺和舌下腺的表達(dá)。RT-PCR顯示大鼠頜下腺有TFF1,2,3 mRNA轉(zhuǎn)錄。頜下腺TFF1只表達(dá)于顆粒曲管上皮細(xì)胞胞質(zhì)；TFF2 和 TFF3分布在閏管、紋狀管和小葉間導(dǎo)管上皮細(xì)胞胞質(zhì)，導(dǎo)管管腔，上皮游離面更明顯。原位雜交證實(shí)TFFsmRNA位于頜下腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的胞漿和胞核。舌下腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞胞質(zhì)呈TFF1,2,3多肽陽(yáng)性。
- 詳細(xì)介紹：
- 1. 本作品屬于自然科學(xué)領(lǐng)域。 2. 主要技術(shù)內(nèi)容：在充分調(diào)研文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，選擇了三葉因子家族在大鼠唾液腺的定位作為研究的突破點(diǎn)，以便能增加頜下腺和舌下腺生物活性多肽的技術(shù)指標(biāo)。此實(shí)驗(yàn)為開(kāi)放性研究，其結(jié)果填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)外三葉因子家族在大鼠頜下腺和舌下腺研究方面的空白，為大鼠下頜下腺和舌下腺分泌多種生物活性物質(zhì)提供了更為廣泛的理論依據(jù)。頜下腺和舌下腺TFF家族的定位部分由科研興趣小組的同學(xué)共同完成，我們能夠獨(dú)立并熟練完成從實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、取材、包埋、切片、PAS染色、免疫組化和原位雜交染色，到RT－PCR等一系列實(shí)驗(yàn)操作，后期圖像分析在科研興趣小組指導(dǎo)老師的幫助下完成。實(shí)驗(yàn)鍛煉了我們的實(shí)踐能力并豐富了我們的科研思維。為以后的學(xué)習(xí)和工作打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。此外，同學(xué)們還參與了課題組老師的“三葉因子家族在大鼠實(shí)驗(yàn)胃潰瘍愈合中的作用”研究。從而為TFFs的臨床研究和治療提供依據(jù)及幫助。 3、技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)：本實(shí)驗(yàn)以免疫組化、原位雜交和RT-PCR技術(shù)揭示了TFF家族在唾液腺的表達(dá)情況。 4、推廣應(yīng)用情況：本結(jié)果豐富了大鼠頜下腺和舌下腺生物活性物質(zhì)的類型，并為深入研究頜下腺和舌下腺TFF家族的作用奠定了基礎(chǔ)。
作品圖片
作品專業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- 目的：探討三葉因子家族在大鼠頜下腺和舌下腺的定位 基本思路：三葉因子與消化性潰瘍和炎癥性腸道疾病的關(guān)系密切,TFFs 能促進(jìn)胃腸道上皮細(xì)胞移行和修復(fù)。我們已經(jīng)初步證實(shí)頜下腺和舌下腺分泌的TFF2及TFF3參與大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的愈合過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)旨在應(yīng)用免疫組織化學(xué)，原位雜交和RT-PCR法探討TFF1.2.3多肽和基因在大鼠頜下腺和舌下腺的定位，期待更近一步了解大鼠頜下腺和舌下腺。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 從蛋白及基因水平檢測(cè)了大鼠頜下腺和舌下腺TFF家族的定位，揭示了頜下腺和舌下腺腺泡分泌物的性質(zhì)，闡述了TFFs分泌形式即發(fā)揮作用方式，填補(bǔ)了大鼠頜下腺和舌下腺關(guān)于TFFs的空白。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 為TFFs在大鼠頜下腺和舌下腺的表達(dá)提供形態(tài)學(xué)證據(jù)，首次證實(shí)大鼠頜下腺和舌下腺表達(dá)TFF1，填補(bǔ)了頜下腺和舌下腺分泌的生物活性多肽中三葉因子1的資料，為進(jìn)一步研究下頜下腺內(nèi)三葉因子的表達(dá)與潰瘍的愈合提供了依據(jù)資料。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的 研究三葉因子家族成員基因和多肽，在大鼠頜下腺和舌下腺的表達(dá)，探討其在頜下腺和舌下腺的定位。 方法：采用免疫組織化學(xué)、原位雜交和RT-PCR檢測(cè)TFF1,TFF2和TFF3 mRNA和多肽在大鼠頜下腺和舌下腺的定位。結(jié)果：頜下腺TFF1只表達(dá)于顆粒曲管的上皮細(xì)胞胞質(zhì)中；TFF2 和 TFF3分布在閏管上皮細(xì)胞、紋狀管和小葉間導(dǎo)管的胞質(zhì)中。分泌管管腔也可見(jiàn)陽(yáng)性物，分泌管和小葉間導(dǎo)管游離面陽(yáng)性信號(hào)更為強(qiáng)烈。RT-PCR顯示：大鼠頜下腺也有TFF1,2,3 mRNA表達(dá)，且雄性大鼠的表達(dá)強(qiáng)于雌性大鼠。原位雜交顯示陽(yáng)性信號(hào)位于頜下腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的胞漿和胞核。舌下腺的導(dǎo)管胞質(zhì)和胞核呈TFF1,2,3 mRNA陽(yáng)性，胞質(zhì)呈TFF1,2,3多肽陽(yáng)性。結(jié)論：在大鼠頜下腺和舌下腺的管腔上皮細(xì)胞中均廣泛表達(dá)TFF1,2,3，雄性大鼠中表達(dá)更為顯著，并可能通過(guò)腔分泌發(fā)揮生理作用。
獲獎(jiǎng)情況
- 未發(fā)表，投稿中
鑒定結(jié)果
- 由于時(shí)間及物力原因，未及鑒定。
參考文獻(xiàn)
- Bossenmeyer-Pourié C, Kannan R, Ribieras S, Wendling C, Stoll I, Thim L, Tomasetto C, Rio MC(2002) The trefoil factor 1 participates in gastrointestinal cell differentiation by delaying G1-S phase transition and reducing apoptosis.J Cell Biol.157(5):761-70. Dalla Valle L, Toffolo V, Belvedere P, Alibardi L(2005).Isolation of a mRNA encoding a glycine-proline-rich beta-keratin expressed in the regenerating epidermis of lizard. Dev Dyn. 234(4):934-47. Devine DA, High AS, Owen PJ, Poulsom R, Bonass WA(2000) Trefoil factor expression in normal and diseased human salivary glands. Hum Pathol 31:509-515. Hoffmann W(2005). Trefoil factors TFF (trefoil factor family) peptide-triggered signals promoting mucosal restitution. Cell Mol Life Sci 62(24):2932-8. Jagla W, Wiede A, Hoffmann W (1999) Localization of TFF3 peptide to porcine conjunctival goblet cells. Cell Tissue Res 296:525–530
同類課題研究水平概述
- 頜下腺和舌下腺屬于消化腺。頜下腺所產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)可歸納為4大類:①生長(zhǎng)分化因子，如NGF、EGF等；② 內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定因子，如激肽釋放酶等；③細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)因子：如脂肽酶等；④消化酶，如酸性磷酸酶等。近年來(lái)研究證實(shí),下頜下腺可以分泌近50種生物活性物質(zhì),如5-HT、神經(jīng)肽Y、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)等,頜下腺分泌的某些因子完全達(dá)到激素水平,因此它具有外分泌腺和內(nèi)分泌腺的雙重功能,在機(jī)體中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。隨著現(xiàn)代組織學(xué)研究方法、手段的不斷改進(jìn),學(xué)者們對(duì)下頜下腺形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能意義的研究又有了很大的進(jìn)展,同時(shí)又檢測(cè)到了許多新的生物活性物質(zhì)。國(guó)內(nèi)關(guān)于下頜下腺的研究也已起步。大鼠下頜下腺呈P物質(zhì)、血管活性腸肽、神經(jīng)肽Y、β-內(nèi)啡肽、胃泌素免疫反應(yīng)陽(yáng)性。這些神經(jīng)肽免疫反應(yīng)物主要分布于GCT細(xì)胞內(nèi),多呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),紋狀管、小葉間導(dǎo)管免疫反應(yīng)物較少,而腺泡細(xì)胞為陰性，P物質(zhì)、血管活性腸肽、降鈣素基因相關(guān)肽。黃威權(quán)等應(yīng)用抗獨(dú)特型單克隆抗體的免疫組織化學(xué)方法，觀察到大鼠下頜下腺漿液性腺泡細(xì)胞及各級(jí)導(dǎo)管的上皮細(xì)胞呈運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞誘向因子陽(yáng)性，這些活性因子對(duì)神經(jīng)的生長(zhǎng)與發(fā)育具有重要的營(yíng)養(yǎng)作用。大鼠下頜下腺顆粒曲管(GCT)上皮細(xì)胞均呈LH和LHR免疫反應(yīng)陽(yáng)性,上述細(xì)胞同樣含有LH和LHR mRNA雜交信號(hào),即大鼠下頜下腺這類上皮細(xì)胞既能產(chǎn)生LH,又能表達(dá)LHR；還有FSHR和FSH免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)共存，自分泌運(yùn)動(dòng)因子及其受體、瘦素及其受體、GnRH及其受體,陽(yáng)性物質(zhì)共同分布在胞質(zhì)內(nèi)的報(bào)道，說(shuō)明LH、FSH、瘦素和GnRH對(duì)下頜下腺功能作用可能是通過(guò)自分泌或旁分泌的作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。我們也發(fā)現(xiàn)三葉因子2定位于在大鼠下頜下腺各級(jí)導(dǎo)管，腺泡陰性，并存在性別差異。王煒等首次觀察到在大鼠下頜下腺各級(jí)導(dǎo)管上皮細(xì)胞內(nèi)有5-羥色胺及其受體，因此提出下頜下腺不僅含有蛋白質(zhì)類和肽類生物活性物質(zhì), 也含有單胺類生物活性物質(zhì)。 經(jīng)查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)未見(jiàn)關(guān)于大鼠頜下腺和舌下腺TFF家族成員（TFF1，TFF2，TFF3）的報(bào)道。本研究國(guó)際領(lǐng)先。
