基本信息
- 項目名稱：
- 漢坦病毒雙啟動子雙價核酸疫苗載體的構(gòu)建
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術(shù)論文
- 簡介：
- 腎綜合征出血熱是一種由漢坦病毒引起的嚴重危害人體健康的自然疫源性疾病。它是我國重點防治的傳染病之一。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗。它可誘導保護性體液免疫和以特異性CTL為標志的細胞免疫，具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點。但一般單抗原表達的核酸疫苗免疫效果并不盡人意。本研究擬構(gòu)建兩種漢坦病毒血清型的單質(zhì)粒雙真核啟動增強子表達載體，將為后續(xù)研制高表達的雙價核酸疫苗奠定基礎(chǔ)。
- 詳細介紹：
- 腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一種由漢坦病毒引起的嚴重危害人體健康的自然疫源性疾病。它是我國重點防治的傳染病之一，其發(fā)病率占全世界的90％以上。在我國人群中流行的漢坦病毒主要有漢灘病毒(HTNV)和漢城病毒(SEOV)兩種亞型，病死率分別約為10%和1%，而且在同一地區(qū)存在此兩種亞型的交叉混合流行。由于其發(fā)病機制復雜、臨床表現(xiàn)多樣、病情危重易變、并發(fā)癥多且沒有特效的治療藥物，所以病死率居高不下，直接危害人民的生命健康和經(jīng)濟建設(shè)。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗。它是將編碼某一特定蛋白抗原的基因片段與真核表達載體相連，而后直接注入人體，即可誘導保護性體液免疫和以特異性CTL為標志的細胞免疫，具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點。但一般單抗原表達的核酸疫苗免疫效果并不盡人意，因此如何提高其免疫原性以刺激機體產(chǎn)生高效的免疫效應成為學者們關(guān)注的焦點。我們前期已構(gòu)建漢灘病毒S基因和B7-1分子基因頭尾相接的順式雙啟動子共表達載體，使多個外源基因在同一細胞中同時表達，顯著增強了其免疫效果。為此，本研究擬構(gòu)建兩種漢坦病毒血清型的單質(zhì)粒雙真核啟動增強子表達載體，并觀察其在真核細胞中的表達情況，將為后續(xù)研制高表達的雙價核酸疫苗奠定基礎(chǔ)。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 在構(gòu)建漢灘病毒（HTNV）和漢城病毒（SEOV）的雙價M2基因單質(zhì)粒雙真核啟動增強子表達載體，并觀察其在真核細胞中的表達情況。 1)從漢灘病毒76-118株和漢城病毒BjHD01株分離M基因片段。應用PCR方法從中擴增出各自的M2基因片段。2）構(gòu)建攜帶雙真核啟動增強子、表達HTNV和SEOV的M2基因片段的真核表達載體。3）檢測上述載體在體外哺乳動物細胞中的表達。
科學性、先進性及獨特之處
- 1、目前本項目已擴增出并分析出所需漢灘病毒和漢城病毒的M2基因片段，并具備構(gòu)建單質(zhì)粒雙增強子-啟動子雙M2基因表達載體的技術(shù)和經(jīng)驗基礎(chǔ)。 2、本項目將構(gòu)建單質(zhì)粒雙增強子-啟動子雙M2基因表達載體，是目前一種對漢坦病毒有良好免疫效果的雙價核酸疫苗。 3、對單質(zhì)粒雙增強子-啟動子雙M2基因表達載體進行順、反式構(gòu)建，并進行此兩種載體表達效果的比較。
應用價值和現(xiàn)實意義
- HFRS是由漢坦病毒引起的一組急性自然疫源性疾病，我國是世界上受其危害最嚴重的國家。至今為止沒有特效藥物，疫苗是預防本病的關(guān)鍵。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗，它具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點。但一般單抗原表達的核酸疫苗免疫效果不佳。通過上述載體的構(gòu)建可以完善雙價核酸疫苗，從而達到對此兩種病毒更好的免疫效果，能為進一步控制我國HFRS奠定基礎(chǔ)。
學術(shù)論文摘要
- 腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一種由漢坦病毒引起的嚴重危害人體健康的自然疫源性疾病。它是我國重點防治的傳染病之一，其發(fā)病率占全世界的90％以上。在我國人群中流行的漢坦病毒主要有漢灘病毒(HTNV)和漢城病毒(SEOV)兩種亞型，病死率分別約為10%和1%，而且在同一地區(qū)存在此兩種亞型的交叉混合流行。由于其發(fā)病機制復雜、臨床表現(xiàn)多樣、病情危重易變、并發(fā)癥多且沒有特效的治療藥物，所以病死率居高不下，直接危害人民的生命健康和經(jīng)濟建設(shè)。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗。它是將編碼某一特定蛋白抗原的基因片段與真核表達載體相連，而后直接注入人體，即可誘導保護性體液免疫和以特異性CTL為標志的細胞免疫，具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點。但一般單抗原表達的核酸疫苗免疫效果并不盡人意，因此如何提高其免疫原性以刺激機體產(chǎn)生高效的免疫效應成為學者們關(guān)注的焦點。本研究擬構(gòu)建兩種漢坦病毒血清型的單質(zhì)粒雙真核啟動增強子表達載體，并觀察其在真核細胞中的表達情況，將為后續(xù)研制高表達的雙價核酸疫苗奠定基礎(chǔ)。
獲獎情況
- 2010年8月發(fā)表于《中國醫(yī)科大學學報》第39卷第8期 文章編號：0258-4646（2010）08-0673-0
鑒定結(jié)果
- pETBlue2—重組片段載體經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳;重組表達片段-HTNV-M2載體經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳;pcDNA 3.1+SEOV-M2-重組表達片段-HTNV-M2載體經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳
參考文獻
- 細胞生物信息技術(shù)：《細胞生物技術(shù)實驗指南》《細胞分子生物學技術(shù)教程》等 基因工程技術(shù)：《基因工程原理和技術(shù)》等 免疫熒光技術(shù)：《熒光和免疫熒光染色技術(shù)及應用》等
同類課題研究水平概述
- 腎病綜合癥是我國重點防治疾病之一，而漢坦病毒是引起的腎病綜合癥的主要病毒。對于漢坦病毒疫苗的研制主要為了在傳統(tǒng)的診治方法以及疫苗的研究上改善發(fā)病情況，預防腎病綜合癥的發(fā)生。漢坦病毒疫苗分為滅活疫苗、減毒疫苗、基因工程疫苗和核酸疫苗。滅活疫苗分為單價疫苗和雙價疫苗,雙價疫苗用于同時存在HTN 和SEO 流行的地區(qū)。減毒活疫苗是通過不同的方法，使病毒的毒力即致病性減弱或喪失，疫苗由完整的病毒組成。它是目前效果最好的疫苗，具有免疫原性好等優(yōu)點。但是近年來，對于漢坦病毒疫苗的研究近年來傾向于核酸疫苗的研制。 核酸疫苗的發(fā)展開始于20世90 年代，它是利用現(xiàn)代生物技術(shù)免疫學、生物化學、分子生物學等研制成的，具有安全穩(wěn)定、特異性強、提供交叉防御、有利于多價多聯(lián)疫苗的研制的優(yōu)點。核酸疫苗分為DNA 疫苗和RNA疫苗兩種，而目前對核酸苗的研究以DNA 疫苗為主。近年來，關(guān)于核酸免疫的研究在世界范圍內(nèi)廣泛展開，所涉及的范圍包括人和動物的各種細菌性、病毒性及寄生蟲病，如流感病毒血凝素基因、乙肝病毒包膜抗原基因、狂犬病毒G 蛋白基因、牛皰疹病毒2型糖蛋白基因、肺炎支原體和利什曼原蟲gp63等。但是大多主要停留在疫苗的構(gòu)建、增強疫苗免疫效果以及動物實驗誘導的層面，在臨床中尚屬于試驗階段。 核酸疫苗是近年來發(fā)展起來的一項新的生物技術(shù)，已成為疫苗研究領(lǐng)域的熱點之一，并獲得了迅速的發(fā)展。研究表明，DNA 疫苗既可作為病毒、細菌或寄生蟲的預防疫苗，也可作為非感染性疾病如腫瘤病的治療用疫苗。另外，它為變態(tài)反應性疾病和自身免疫病的治療也提供了新的希望。因此核酸疫苗有可能發(fā)展成為其它物質(zhì)無可替代的產(chǎn)品，為將來人類和動物的健康保駕護航。
