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基本信息
- 項目名稱：
- 絞股藍(lán)總皂苷抑制泡沫細(xì)胞形成的分子機制研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 本作品結(jié)合中藥多靶點藥理作用及中藥整體研究特點，通過研究可闡明絞股藍(lán)總皂苷抑制泡沫細(xì)胞分子機制，為絞股藍(lán)總皂苷臨床應(yīng)用提供良好的實驗基礎(chǔ)，對新型抗動脈粥樣硬化藥物的研制具有十分重要的意義。
- 詳細(xì)介紹：
- 本研究以ox-LDL誘導(dǎo)人單核細(xì)胞THP-1形成的泡沫細(xì)胞為對象，用不同濃度的絞股藍(lán)總皂苷干預(yù)泡沫細(xì)胞形成，明確絞股藍(lán)總皂苷對泡沫細(xì)胞形成的影響；并應(yīng)用熒光定量PCR的方法檢測巨噬細(xì)胞膜上介導(dǎo)內(nèi)吞氧化脂蛋白的最主要清道夫受體CD36、膽固醇逆轉(zhuǎn)運蛋白（ABCA1）及過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-α、LXR-α）基因表達(dá)，從細(xì)胞膽固醇平衡角度探討絞股藍(lán)總皂苷干預(yù)泡沫細(xì)胞形成的作用，并用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)進(jìn)一步篩選絞股藍(lán)總皂苷干預(yù)泡沫細(xì)胞形成相關(guān)的蛋白質(zhì)，從整體蛋白質(zhì)水平闡明絞股藍(lán)總皂苷抑制泡沫細(xì)胞形成的分子機制。為絞股藍(lán)總皂甙臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)，對從抑制泡沫細(xì)胞形成角度開發(fā)抗動脈粥樣硬化的新藥提供理論支持，對其它中藥作用機制的研究也具有重要的參考價值。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：利用分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究絞股藍(lán)總皂苷抑制泡沫細(xì)胞形成的分子機制。 基本思路： 1.本研究以ox-LDL誘導(dǎo)THP-1形成泡沫細(xì)胞為對象，用不同濃度的GPS干預(yù)泡沫細(xì)胞形成； 2.應(yīng)用熒光定量PCR的方法檢測CD36、ABCA1、PPAR-α、LXR-α基因表達(dá)； 3.應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究GPS作用前后泡沫細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨特之處
- 1. 通過建立細(xì)胞模型，從細(xì)胞水平進(jìn)行中藥藥理的研究； 2. 細(xì)胞膽固醇平衡角度探討絞股藍(lán)總皂苷干預(yù)泡沫細(xì)胞形成的作用； 3. 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究絞股藍(lán)總皂苷抑制泡沫細(xì)胞形成的分子機制，更符合中藥多靶點藥理作用的特點及中醫(yī)中藥整體性研究的要求。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 動脈粥樣硬化是常見的危害嚴(yán)重的心血管疾病，給人類的健康造成了極大的危害，而泡沫細(xì)胞的形成貫穿了As發(fā)生、發(fā)展的整個過程。因此，調(diào)控泡沫細(xì)胞的形成與凋亡，對于穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊、延緩斑塊進(jìn)展和防止急性冠脈事件發(fā)生具有重要的意義。通過本研究可闡明絞股藍(lán)總皂苷抑制泡沫細(xì)胞分子機制，為絞股藍(lán)總皂苷臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。對新型抗動脈粥樣硬化藥物的研制具有十分重要的意義。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：通過體外實驗研究絞股藍(lán)總皂苷抑制巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞形成的分子機制。方法:體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，以10μg/mL ox-LDL誘導(dǎo)使其泡沫化，并用GPS進(jìn)行干預(yù)。通過油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積情況和酶比色法定量檢測細(xì)胞內(nèi)CE的變化。 熒光定量PCR檢測CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α 基因表達(dá)。另外，提取GPS作用前后細(xì)胞內(nèi)總蛋白質(zhì)，經(jīng)雙向電泳后進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組分析，并對差異蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。結(jié)果:與泡沫組相比，GPS組的油紅O染色陽性率和細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量均顯著減少，同時CD36受體mRNA表達(dá)明顯降低，而ABCA1、LXR-α、PPAR-α基因表達(dá)明顯升高。GPS作用后，銅/鋅超氧化物歧化酶、磷脂酶C-α/蛋白質(zhì)二硫化異構(gòu)酶等蛋白表達(dá)量增加，而細(xì)胞內(nèi)氯離子通道1、糖原磷酸化酶、熱休克蛋白70等表達(dá)降低。結(jié)論：GPS可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞泡沫化，減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)逆轉(zhuǎn)運出細(xì)胞，抑制泡沫細(xì)胞形成及緩解動脈粥樣硬化進(jìn)程。該作用可能與GPS通過改變細(xì)胞CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α基因表達(dá)有關(guān)。
獲獎情況
- 2011年在浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報發(fā)表論文《絞股藍(lán)總皂苷調(diào)節(jié)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞膽固醇平衡的作用機制》
鑒定結(jié)果
- 通過審核
參考文獻(xiàn)
- [1]Chernobelsky A, Ashen MP, Blumenthal RS, et al. High density lipop rotein cholesterol: a potential therapeutic target for prevention of coronary artery disease [J]. Prev Cardiol, 2007, 10(3): 26-30. [2]Tabas I. Consequences of cellular cholesterol accumulation: basic concep ts and physiological imp lications [J]. Clin Invest, 2002, 110 (7): 905-911. [3]Chinetti G, Lestavel S, Bocher V, et a1. PPAR- alpha and PPAR- gamma activators induce cholesterol removal from human macrophage foam cells through stimulation of the ABCA1 pathway [J]. 2001, 7(1): 53-58. [4]王術(shù)玲, 潘華新, 王培訓(xùn). THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型的建立及鑒定[J]. 中藥新藥與臨床藥理.2009, 20(3): 281-284. [5]Ogata M, Tsujita M, Hossain MA, et al. On the mechanism for PPAR agonists to enhance ABCA1 gene expression. Atherosclerosis [J]. 2009 Aug, 205(2): 413-419. [6]王淳本, 宗義強, 吳萬生, 等. 兩步超速離心法快速分離大量血漿極低密度脂蛋白及低密度脂蛋白[J]. 同濟醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 1995, 24(3): 169-170.
同類課題研究水平概述
- 動脈粥樣硬化(atherosclerosis, As)是常見的危害嚴(yán)重的心血管疾病，其中泡沫細(xì)胞的形成貫穿了As發(fā)生、發(fā)展的整個過程，而其分泌的炎性細(xì)胞因子和泡沫細(xì)胞的凋亡對斑塊的穩(wěn)定性有重要的作用。因此，調(diào)控泡沫細(xì)胞的形成與凋亡，對于穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊、延緩斑塊進(jìn)展和防止急性冠脈事件發(fā)生具有重要的意義。 LDL源性膽固醇在動脈內(nèi)膜單核巨噬細(xì)胞內(nèi)積累，致泡沫細(xì)胞和脂紋形成是AS最早期的病理變化，也是脂紋和AS損害形成的初級階段。當(dāng)LDL 氧化修飾形成ox-LDL 后，不受細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，從而使膽固醇在細(xì)胞內(nèi)過量積聚而形成泡沫細(xì)胞，最終導(dǎo)致AS 的發(fā)生。因此維持細(xì)胞膽固醇攝入及其逆轉(zhuǎn)運平衡在抗AS發(fā)生過程具有重要意義。 CD36在膽固醇攝入過程中起了重要的作用。1993年發(fā)現(xiàn)CD36在巨噬細(xì)胞中可識別吞噬ox-LDL，介導(dǎo)細(xì)胞泡沫化。研究報道它還可與acLDL，mdaLDL等結(jié)合，同樣引起細(xì)胞內(nèi)膽固醇堆積，造成細(xì)胞泡沫化。Boullier等研究發(fā)現(xiàn)CD36與ox-LDL的識別由氧化磷脂介導(dǎo)，識別位點為氧化的脂質(zhì)。結(jié)果提示CD36過表達(dá)可促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成。 巨噬細(xì)胞向外排出膽固醇可減慢其泡沫化進(jìn)程。其過程主要依靠膽固醇逆運轉(zhuǎn)機制。膽固醇逆運轉(zhuǎn)指HDL將細(xì)胞內(nèi)多余膽固醇轉(zhuǎn)運至肝臟進(jìn)行代謝循環(huán)或以膽酸形式分泌。目前已知的逆運轉(zhuǎn)方式主要有3種：富含磷脂的受體介導(dǎo)的水溶性擴散途徑、清道夫受體B-Ⅰ/HDL途徑、ABCA1/apoA1途徑。 目前，國內(nèi)外對絞股藍(lán)皂苷抗動脈粥樣硬化作用進(jìn)行了大量的藥理和臨床臨床效的研究，結(jié)果表明絞股藍(lán)皂苷具有調(diào)節(jié)血脂代謝、抗炎作用、抗過氧化作用、抑制血小板聚集、改善血液流變學(xué)和保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等多種功效。由此可見，絞股藍(lán)皂苷在防治心血管疾病方面顯示出強大的多靶點效應(yīng)。但目前分子水平的研究多采用從絞股藍(lán)中尋找有效的單一成分的策略，然而中藥并不是單個化合物，而是混合物，其有效物質(zhì)往往并不是單一成分，而是多種成分，這些成分作用于多個靶點通過多種機制協(xié)同產(chǎn)生作用，因此有“多成分、多靶點和多機制”的特點。蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics) 是從整體上研究細(xì)胞或組織內(nèi)，特定的時間和空間內(nèi)全部蛋白質(zhì)的組成及其相互作用規(guī)律的科學(xué)，因此對于多組分中藥包括復(fù)方的多靶點作用的研究具有天然的優(yōu)勢。
