基本信息
- 項目名稱：
- 滅活A組鏈球菌對紅細胞及其膜蛋白影響的實驗研究
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 本實驗通過細菌培養(yǎng)、差速離心分離、提取純化和SDS—PAGE電泳技術，對紅細胞(RBC)膜蛋白含量進行分析，研究A組鏈球菌對RBC及其膜蛋白的影響。結果顯示，A組鏈球菌致使RBC形態(tài)異常，SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)RBC膜蛋白有多條帶含量顯著低于生理鹽水對照組。認為滅活A組鏈球菌引起溶血性貧血是RBC膜蛋白的含量減少所致。
- 詳細介紹：
- 本研究旨在探究Ａ組鏈球菌致溶血性貧血的機理，為溶血性貧血疾病治療提供新思路。采用滅活Ａ組鏈球菌制備家兔溶血性貧血模型，在注射后5個不同時間點取血，涂片光鏡觀察；通過差速離心分離、提取純化和SDS—PAGE電泳技術，對紅細胞(RBC)膜蛋白含量進行分析，研究A組鏈球菌對RBC及其膜蛋白的影響。每個時間點均設有生理鹽水對照組。結果顯示，A組鏈球菌在第96h、7d、和第14d，致RBC形態(tài)異常，體積和中央淡染區(qū)大小不等，計數(shù)畸形率，實驗組高于對照組（P<0.05），差異有顯著性。SDS-PAGE電泳分析發(fā)現(xiàn)有多條帶RBC膜蛋白含量顯著低于生理鹽水對照組。認為滅活A組鏈球菌引起溶血性貧血可能是是RBC膜蛋白的含量減少所致。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的:通過對A組鏈球菌影響紅細胞膜蛋白含量的時效研究，在一個新的方向探究其對紅細胞破壞的機制，從而為以后的研究提供一種新的思路。 基本思路：實驗組分別注射滅活的A組鏈球菌全菌體（2.5ml/只）至大鼠黑質致密部，對照組注射等量生理鹽水，按照設定的時間梯度觀察兩組家兔的體重變化、RBC形態(tài)變化和RBC膜蛋白含量變化。
科學性、先進性及獨特之處
- 本研究采用滅活Ａ組鏈球菌制備家兔溶血性貧血模型，在注射后不同時間點取血，涂片光鏡觀察；差速離心分離、提取純化RBC膜蛋白，率先用SDS-PAGE電泳檢測其含量。研究Ａ組鏈球菌致溶血性貧血的機理，為治療溶血性貧血提供新思路。發(fā)現(xiàn)A組鏈球菌在第96h、7d、14d致RBC形態(tài)異常，計數(shù)畸形率，實驗組高于對照組（P<0.05），差異有顯著性。SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)多條帶RBC膜蛋白含量顯著低于對照組。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 研究表明，A組鏈球菌能導致紅細胞溶解。紅細胞膜蛋白含量的改變，會對維持紅細胞的可變形性和完整性產(chǎn)生一定的影響。但A組鏈球菌誘導紅細胞溶解的機制尚不清楚。為此，本研究采用滅活Ａ組鏈球菌制備家兔溶血性貧血模型，通過比較實驗組與對照組之間的差異，探究不同時間點A組鏈球菌對紅細胞形態(tài)的影響和紅細胞膜蛋白含量的變化。這對于研究Ａ組鏈球菌致溶血性貧血的機理具有很重要的理論意義，也為治療溶血性貧血提供新思路。
學術論文摘要
- 【目的】研究滅活Ａ組鏈球菌誘發(fā)紅細胞破裂的機理，為A組鏈球菌導致的溶血性疾病治療提供新思路?！痉椒ā繉㈦s種家兔隨機分為對照組和實驗組，每組2只并分別稱重，實驗組從耳緣靜脈注射2.5ml滅活的A組鏈球菌全菌體，對照組從耳緣靜脈注射2.5ml生理鹽水。分別于注射后第6h、48h、96h、7d、14d時從耳緣靜脈取血2ml，常規(guī)分離紅細胞并提取膜蛋白，十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析各組紅細胞膜蛋白的百分含量。每次取材均做涂片，瑞氏染色，光鏡下觀察紅細胞形態(tài)和計數(shù)異常率?！窘Y果】實驗組家兔的體重在相同時間點較對照組明顯降低。注射A組鏈球菌第96h、7d、和第14d，實驗組家兔光鏡下均見紅細胞形態(tài)異常，大小不等，部分紅細胞中央淡染區(qū)消失，部分紅細胞中央淡染區(qū)擴大。計數(shù)紅細胞畸形，實驗組高于對照組（P<0.05），差異有顯著性。SDS-PAGE電泳分析各組紅細胞膜蛋白的百分含量，發(fā)現(xiàn)有多條帶實驗組紅細胞膜蛋白含量顯著低于生理鹽水對照組。【結論】滅活A組鏈球菌從耳緣靜脈注射第96h始能引起紅細胞形態(tài)異常，其機理可能是紅細胞膜蛋白的含量變化所致。
獲獎情況
- 論文《滅活A組鏈球菌對紅細胞及其膜蛋白影響的實驗研究》已投《醫(yī)學研究雜志》。
鑒定結果
- 論文《滅活A組鏈球菌對紅細胞及其膜蛋白影響的實驗研究》已投《醫(yī)學研究雜志》。
參考文獻
- [1] Fukuizumi T， Inoue H， Tsujisawa T， et a1．Streptococcus sobrinus antigens that react to salivary antibodies induced by tonsillar application of formalin-killed S sobrinus in rabbits[J]．Infect Immun，2000，68(2)：725—731． [2] Fukuizumi T，Inoue H，Tsujisawa T，et a1．Tonsillar application of form alin-killed cells of Streptococcus sobrinus reduces experimental dental caries in rabbits [J]．Infect Immun，1999，67(1)：426-428． [3] 方福德，周 呂，丁濂，等．現(xiàn)代醫(yī)學實驗技巧全書一生物膜研究技術[M]．北京：北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)學大學聯(lián)合出版社，1995．521～523. [4] 汪家政，范明 ．蛋白質技術手冊[M]．北京：科學出版社，2002．79～82. [5] 王也飛,胡翊群.蛋白異常與膜骨架相關溶血性貧血的發(fā)生[J].J Diagn Concepts Pract,2009,8(1)：104-107. [6] 唐彥萍,涂應琴.GSH 引起的病態(tài)紅細胞膜蛋白變化[J].遵義醫(yī)學院學報,1994,7(1)：15-17.
同類課題研究水平概述
- 20世紀8O年代以來，對人類紅細胞膜蛋白異常與紅細胞疾病的研究已有不少進展，尤其是對膜骨架蛋白的分子水平異常的研究，不斷有新發(fā)現(xiàn)。這對某些紅細胞疾病的診治有較大幫助。然而，對于A組鏈球菌是如何誘發(fā)紅細胞溶解機制的研究甚少。 現(xiàn)有研究表明，A組鏈球菌能改變血細胞的性能和數(shù)量，并且使紅細胞溶血。紅細胞膜為雙層磷脂結構，其間鑲嵌著多種膜蛋白。這些膜蛋白包括包埋在脂質雙分子層中的整合蛋白及存在于膜內(nèi)側的細胞膜骨架蛋白，而后者與紅細胞膜缺陷所致的溶血關系密切。細胞膜骨架蛋白維持紅細胞的正常形態(tài)和變形性，其量或質的缺陷及蛋白質間相互作用異常可造成多種紅細胞疾病。并且現(xiàn)已肯定，溶血性疾病患者的紅細胞膜蛋白較正常者減少。已有相關實驗證明紅細胞膜的鑲嵌蛋白數(shù)量、排序及質量的改變可能是溶血性貧血和再生障礙性貧血紅細胞壽命縮短的重要原因。 本課題以雜種家兔為實驗對象，從耳緣靜脈注射滅活Ａ組鏈球菌全菌體，觀察設定的不同時間點紅細胞形態(tài)學變化，按照上述時間點采集相同血量的血液樣品進行離心分離用低滲溶血法差速離心獲得紅細胞膜，經(jīng)膜蛋白的純化獲得高純度的膜蛋白，經(jīng)十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PAGE)，對所獲高純度膜蛋白進行分離，通過對所獲條帶的分析，進而整理出A組鏈球菌對紅細胞膜蛋白含量的時效影響的數(shù)據(jù)結果。旨在對A組鏈球菌誘發(fā)紅細胞溶解及膜蛋白含量的時效變化進行研究，探討其對紅細胞理化性質的影響，從而為許多相關臨床疾病的病因研究提供一些思路。
