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基本信息
- 項目名稱：
- 艾葉多糖對小鼠腹腔巨噬細胞內(nèi)酶活性的影響
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 巨噬細胞作為很重要的免疫細胞，不僅參與機體的特異性免疫反應(yīng)和非特異性免疫反應(yīng)，而且是兩種免疫反應(yīng)聯(lián)系的“橋梁細胞”，并作為效應(yīng)細胞起作用。艾葉資源豐富，經(jīng)濟易得，對其提取物的藥理活性研究也逐漸增多，但國內(nèi)外對艾葉多糖的研究主要集中在抗體活性上，因此，研究艾葉多糖對巨噬細胞的激活作用將具有重要意義。本實驗旨在通過細胞化學(xué)術(shù)研究艾葉多糖對體外巨噬細胞胞內(nèi)酶的影響。
- 詳細介紹：
- 為了研究艾葉多糖對巨噬細胞的活化作用，本文采用水浴回流和乙醇沉淀法提取了艾葉多糖，從小鼠腹腔中分離提取了巨噬細胞。將分離培養(yǎng)7 d后的巨噬細胞分為對照組和多糖組。多糖組分別以終濃度為10μg/mL、100μg/mL和500μg/mL艾葉多糖作用巨噬細胞，對照組用相應(yīng)體積的水溶媒，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后行酶化學(xué)染色，檢測巨噬細胞內(nèi)酶的活性。圖1顯示酸性磷酸酶（ACP）染色結(jié)果，與對照組比較，各濃度組顏色均加深，且濃度越高顏色越深；圖2顯示α一醋酸奈酚酯酶（ANAE）染色結(jié)果，與對照組比較，各濃度組顏色均加深，且濃度越高顏色越深；圖3顯示琥珀酸脫氫酶（SDH）染色結(jié)果，與對照組比較，低中濃度組顏色無變化，而高濃度組顏色明顯加深；圖4顯示三磷酸腺苷酶（ATPase）染色結(jié)果，與對照組比較，各濃度多糖組顏色均無明顯變化。由此可見艾葉多糖能增強體外培養(yǎng)巨噬細胞ACP、ANAE、SDH的活性。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 文獻報道多糖具有提高機體免疫功能的作用，但艾葉多糖在這方面的研究未見有報道。本實驗從大鼠腹腔分離提取巨噬細胞，用不同濃度的艾葉多糖作用巨噬細胞，采用細胞酶化學(xué)技術(shù)定性研究艾葉多糖對巨噬細胞特異性酶，即酸性磷酸酶（ACP），α-醋酸奈酚酯酶（ANAE ）、三磷酸腺苷酶酶（ATPase）以及琥珀酸脫氫酶（SDH）的影響，從而研究艾葉多糖對巨噬細胞的激活作用，旨在研究艾葉多糖提高機體免疫力的藥理活性。
科學(xué)性、先進性及獨特之處
- 本實驗采用細胞模型，運用細胞酶化學(xué)技術(shù)，將分子生物學(xué)和形態(tài)學(xué)相結(jié)合形象客觀地研究了艾葉多糖對巨噬細胞內(nèi)酶的激活作用。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 本實驗結(jié)果將從提高巨噬細胞免疫功能角度，說明艾葉的抗腫瘤和抑菌活性，為艾葉的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。同時，通過對本實驗的研究和論文的撰寫更好地培養(yǎng)學(xué)生的科研能力和創(chuàng)新思維能力，以及撰寫學(xué)術(shù)論文的能力。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 為了研究艾葉多糖對巨噬細胞的活化作用，采用水浴回流和乙醇沉淀法，從艾葉中提取了多糖，以無血清DMEM培養(yǎng)液灌洗小鼠腹腔，分離提取腹腔巨噬細胞，艾葉多糖以不同濃度與體外培養(yǎng)巨噬細胞作用48 h，行細胞酶化學(xué)染色，光學(xué)顯微鏡觀察巨噬細胞胞內(nèi)酶的活性變化。結(jié)果：艾葉多糖能使巨噬細胞的酸性磷酸酶、α一醋酸奈酚酯酶和琥珀酸脫氫酶的活性明顯增強，且與其濃度有關(guān)，對三磷酸腺苷酶的活性不增強。結(jié)論：艾葉多糖能增強體外培養(yǎng)巨噬細胞的多種胞內(nèi)酶的活性。
獲獎情況
- 2010年12月《艾葉水提物及其分離組分的抑菌活性研究》獲黃理工學(xué)院大學(xué)生科技節(jié)科技論文大賽二等獎 《艾葉水提物及分離組分對金黃色葡萄球菌的抑菌活性研究》發(fā)表于2010年第六期黃石理工學(xué)院學(xué)報
鑒定結(jié)果
- 艾葉多糖能增強體外培養(yǎng)巨噬細胞的多種胞內(nèi)酶的活性
參考文獻
- 現(xiàn)有技術(shù)：1.分離提取原代細胞 2. 原代細胞的體外培養(yǎng) 3. 酶細胞化學(xué)染色 技術(shù)文獻： [1] 謝錦玉.細胞化學(xué)方法,鄂征.組織培養(yǎng)[M]，第二版.北京人民衛(wèi)生出版社,1988:202–240 [2] 趙德來.豬苓多糖和氫化考的松對小鼠腹腔巨噬細胞的作用－細胞化學(xué)研究[J].解剖學(xué)報，1986，17(2):186–187 [4] 胡慶和，謝錦玉，張蒞峽，等.紅毛五加多糖對腹腔巨噬細胞作用的定量細胞化學(xué)研究[J].中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志，1993，2(3):192–194
同類課題研究水平概述
- 近幾十年來，人們發(fā)現(xiàn)從植物多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎癥、抗病毒、抗輻射及降血糖等多種功能,有“生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑”之稱。植物多糖對機體的特異性和非特異性免疫功能具有增強作用，其激活巨噬細胞是其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的重要途徑之一。大量植物多糖能提高巨噬細胞酶類（如SOD、LSZ等）和細胞因子（TNF-a、IL-6、IL-12等）的分泌，從而提高其免疫效應(yīng)。 巨噬細胞內(nèi)具有多種胞內(nèi)和胞外酶，也可分泌一些可溶性因子。溶菌酶（LSZ）是巨噬細胞的一種胞外酶，可在體外溶解細菌[1]。胞內(nèi)酶中含有細胞的特異性酶，如酸性磷酸酶(ACPase)等。巨噬細胞的運動、吞噬、對抗原的處理及活性物質(zhì)的分泌均與細胞內(nèi)酶的活性有關(guān)[2-5]。受到刺激的巨噬細胞進一步分化成熟，活力增強，吞噬功能增強，促使細胞內(nèi)溶菌酶大量增多，細胞胞內(nèi)多種酶活性顯著增強，有效地執(zhí)行其功能。 有報道稱艾葉具有抗癌和抑菌作用。目前我們正參與喻昕院長關(guān)于艾葉提取物的抗癌、抗菌項目的研究，證實了艾葉水提物具有抗癌和抑菌的藥理活性。項目成員基于文獻報道多種植物多糖能提高免疫功能，試圖從艾葉的多糖提取物，從提高免疫功能角度，探究艾葉的抗癌抗菌作用。 對于艾葉多糖的研究，國內(nèi)外對艾葉多糖的藥理活性主要集中在抗體活性上。巨噬細胞作為很重要的免疫細胞，外源性活性物質(zhì)對巨噬細胞的最基本作用就是刺激巨噬細胞，使胞外酶活性增強，同時釋放更多的細胞因子。項目研究目的是從巨噬細胞的特異性酶以及多種胞內(nèi)酶出發(fā)，探討艾葉多糖對巨噬細胞的激活作用。本實驗的陽性結(jié)果將從提高巨噬細胞免疫功能角度，說明艾葉的抗腫瘤和抑菌活性。同時，通過對本項目研究也能更好地培養(yǎng)我們的科研能力和創(chuàng)新思維能力，以及承擔(dān)科研項目的能力。
