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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 三葉木通基因組DNA提取方法的研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本實(shí)驗(yàn)用CTAB法和SDS法提取木通科木通屬三葉木通的基因組DNA,并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè),獲取高質(zhì)量的DNA。結(jié)果表明兩種方法都能提取到DNA,電泳條帶清晰。CTAB法提取的DNA純度高，完整性好。SDS法提取的DNA量多，但質(zhì)量不高。
- 詳細(xì)介紹：
- 目的：用CTAB法和SDS法提取木通科木通屬三葉木通的基因組DNA,并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè),獲取高質(zhì)量的DNA。方法：采用CTAB法和SDS法提取三葉木通嫩葉中的DNA,通過瓊脂糖凝膠電泳、紫外分光光度法測(cè)其質(zhì)量。結(jié)果：兩種方法都能提取到DNA,電泳條帶清晰。CTAB法提取的DNA純度高，完整性好。SDS法提取的DNA量多，但質(zhì)量不高。結(jié)論：兩種方法都可以提取到三葉木通的DNA，CTAB法優(yōu)于SDS法。SDS法提取率高，但純度不好，而CTAB法提取的DNA 純度高，完整性好，可以用于分子生物學(xué)的相關(guān)研究。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目前，藥用植物DNA的提取有多種方法：高鹽低pH法、SDS法、CTAB法等，但效果不一。不同植物材料含有不同種類和數(shù)量的次生代謝產(chǎn)物，要獲取高質(zhì)量的DNA，需要有針對(duì)性地選擇不同的提取方法。通過比較CTAB法和SDS法提取的三葉木通DNA的質(zhì)量，尋求一種最適于三葉木通的高質(zhì)量DNA提取方法，為今后進(jìn)一步的三葉木通種質(zhì)資源DNA分子標(biāo)記技術(shù)研究奠定基礎(chǔ)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 從三葉木通葉片中提取高質(zhì)量的基因組DNA，是DNA分子標(biāo)記技術(shù)成功應(yīng)用的前提條件。本文通過瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度法比較CTAB法和SDS法提取三葉木通DNA的質(zhì)量，建立了最適于三葉木通的高質(zhì)量DNA提取方法。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 通過對(duì)CTAB法和SDS法提取的DNA質(zhì)量的比較，建立適于AFLP反應(yīng)的高質(zhì)量三葉木通基因組DNA提取方法，為進(jìn)一步DNA分子標(biāo)記技術(shù)成功應(yīng)用，提高其產(chǎn)量和質(zhì)量奠定基礎(chǔ)，對(duì)緩解藥材緊張、保證藥材質(zhì)量、確保臨床療效有重大意義。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目前，藥用植物DNA的提取有多種方法：高鹽低pH法、SDS法、CTAB法等，但效果不一。不同植物材料含有不同種類和數(shù)量的次生代謝產(chǎn)物，要獲取高質(zhì)量的DNA，需要有針對(duì)性地選擇不同的提取方法。CTAB是一種去污劑，既能裂解細(xì)胞，又能有效沉淀多糖。它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中是可溶的，當(dāng)降低鹽濃度到一定程度時(shí)，從溶液中沉淀，通過離心就可將核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖物質(zhì)分開。SDS是一種陽離子去污劑， 含有高濃度SDS的提取緩沖液可對(duì)植物細(xì)胞裂解，并通過提高鹽濃度(KAc或NH4Ac) 和降低溫度( 冰上恒溫) 的辦法沉淀除去蛋白和多糖。本實(shí)驗(yàn)比較CTAB法和SDS法提取的DNA質(zhì)量，研究發(fā)現(xiàn)兩種方法都可以提取到三葉木通的DNA，CTAB法優(yōu)于SDS法。SDS法提取率高，但純度不好，而CTAB法提取的DNA 純度高，完整性好，可以用于分子生物學(xué)的相關(guān)研究。
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- SDS法產(chǎn)量高，但純度低、電泳拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，說明所得的樣品中含有雜蛋白或苯酚。采用CTAB法雖然產(chǎn)量低，但純度高，未出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。CTAB法提取三葉木通總DNA要優(yōu)于SDS法。
參考文獻(xiàn)
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同類課題研究水平概述
- 1.化學(xué)研究 迄今為止，國內(nèi)外學(xué)者從木通屬植物中已經(jīng)分離得到了69個(gè)三萜和三萜皂苷類化合物。果實(shí)中含有由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖和半乳糖組成的多糖。蔣立科,劉沛?zhèn)惖确謩e對(duì)白木通和三葉木通成熟果實(shí)中的氨基酸進(jìn)行測(cè)定，將結(jié)果表明，2種木通氨基酸種類相同，共含有17種，其中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、精氨酸和賴氨酸含量較高。 2.栽培技術(shù)研究 2.1種子繁殖：種子先用堿水搓洗，用清水漂洗干凈，瀝干水分，及時(shí)撒播在已整理好的苗床內(nèi)。 2.2埋條繁殖：選1-2年生枝蔓埋入土中，1個(gè)月后即可生根，一年四季均可繁殖。 2.3分根繁殖：分根繁殖在早春萌芽前進(jìn)行。一兜多株的可用從根部分成多株。 2.4扦插繁殖：選擇生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的1-2年生枝蔓，剪成10cm長(zhǎng)的枝條，扦插到已整理好的苗床內(nèi)。 3.藥理活性 研究兔慢性利尿試驗(yàn)，表明木通具有抗水腫和利尿作用，與保泰松合用，會(huì)增加尿量，增強(qiáng)抗水腫作用。藥理實(shí)驗(yàn)表明白木通種子中的乙醇提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞有抑制作用。 4.分子水平研究 4.1 遺傳變異 熊大勝等研究發(fā)現(xiàn)三葉木通地理變異的基本模式是以海拔垂直梯度變異為主，緯向漸變?yōu)檩o；海拔及緯度差異產(chǎn)生溫度和光照差異，水熱因子的綜合選擇作用是三葉木通莖藤生長(zhǎng)性狀地理變異的重要原因，其中溫度和光照是主導(dǎo)因子。 4.2 染色體 熊大勝等用ASG法對(duì)三葉木通根、莖尖細(xì)胞進(jìn)行染色體制片．探討其染色體組型。結(jié)果表明：三葉術(shù)通核型為2n=2X =16 =10M+2SM+2ST+2T，X=8；2B類型，第2號(hào)染色體上有一對(duì)隨體。三葉木通細(xì)胞中存在有混倍性現(xiàn)象，實(shí)生苗2n=4X=32的四倍性細(xì)胞占7.9％；秋水仙素誘變茁根莖占31.8％-37.9％。 4.3 同工酶 黃佩蓓等人采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對(duì)三葉木通可溶性蛋白及同工酶進(jìn)行初步研究。結(jié)果表明，各樣品的蛋白質(zhì)、同工酶酶譜有共有帶，但酶帶數(shù)量與活性強(qiáng)度有差異；POD同工酶差異明顯，可作為品種鑒定的生化指標(biāo)。 4.4 分子標(biāo)記 席在星通過研究建立了適合木通屬植物RAPD分析應(yīng)用體系， PCR循環(huán)體系為：94℃，4min一[一94℃，30S一37oC，90S一72oC，60S一]一72℃，5min，40個(gè)循環(huán)。李峰等通過RAPD實(shí)驗(yàn)分析得出：白木通是三葉木通的一個(gè)變種，與其有較近的親緣關(guān)系。
