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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 人FUT4基因近端啟動子生物信息學(xué)分析及載體構(gòu)建
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶（FUT）是編碼一組催化糖復(fù)合物糖鏈巖藻糖化的酶蛋白，經(jīng)發(fā)現(xiàn)其中的FUT4在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常，因此，對FUT4基因的深入研究，將有助于進(jìn)一步了解腫瘤的發(fā)病機(jī)制。本研究初步以熒光蟲熒光素酶報告基因表達(dá)載體pGL6質(zhì)粒為載體構(gòu)建FUT4的啟動子序列的報告基因質(zhì)粒，為進(jìn)一步研究FUT4基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
- 詳細(xì)介紹：
- 本實(shí)驗(yàn)使用First EF 程序分析并獲得FUT4近端啟動子序列。PCR法擴(kuò)增FUT4基因近端啟動子序列，PCR產(chǎn)物經(jīng)Kpn I和Nhe I雙酶切后定向克隆到pGL 6載體。重組質(zhì)粒行Kpn I和Nhe I雙酶切及測序鑒定的方法，成功構(gòu)建FUT4近端啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列熒光蟲熒光素酶報告基因表達(dá)載體，為利用光素酶報告基因檢測系統(tǒng)研究FUT4近端啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的分布及其性質(zhì)提供了基本實(shí)驗(yàn)條件。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：通過對FUT4基因的深入研究，分析人FUT4基因近端啟動子的生物學(xué)信息及載體的構(gòu)建，為進(jìn)一步了解腫瘤的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 基本思路：使用First EF 程序分析并獲得FUT4近端啟動子序列。PCR法擴(kuò)增FUT4基因近端啟動子序列，PCR產(chǎn)物經(jīng)Kpn I和Nhe I雙酶切后定向克隆到pGL 6載體。重組質(zhì)粒行Kpn I和Nhe I雙酶切及測序鑒定。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 本課題在前期工作中報道FUT4過表達(dá)通過MAPK和PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)控A431細(xì)胞的增殖，具有促進(jìn)作用。本課題是對FUT4基因表達(dá)調(diào)控的深入基礎(chǔ)，該項(xiàng)目對揭露上皮來源的腫瘤的發(fā)病機(jī)制具有一定的理論意義。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實(shí)意義
- 目前腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康，因此，對腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究，在降低腫瘤的死亡率，減少復(fù)發(fā)率，提高人類生活質(zhì)量方面有著重要意義。人FUT4在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常，如腸癌、克隆癌、胰腺癌中FUT4明顯升高。但是，人FUT4基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究初步以熒光蟲熒光素酶報告基因表達(dá)載體pGL6質(zhì)粒為載體構(gòu)建FUT4的啟動子序列的報告基因質(zhì)粒，為進(jìn)一步研究FUT4基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的:對人FUT4基因近端啟動子進(jìn)行生物信息學(xué)分析，預(yù)測可能的調(diào)控區(qū)域，并構(gòu)建相應(yīng)基因序列熒光蟲熒光素酶報告基因表達(dá)載體。方法:使用First EF程序分析并獲得FUT4近端啟動子序列并用PCR法擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物經(jīng)KpnI和NheI雙酶切后定向克隆到pGL6載體。重組質(zhì)粒行KpnI和NheI雙酶切及測序鑒定。結(jié)果:使用First EF程序獲得2.0Kb的FUT4基因近端啟動子序列。KpnI和NheI雙酶切及測序鑒定證實(shí)構(gòu)建的pGL6-FUT4質(zhì)粒插入片段正確無誤。結(jié)論:成功構(gòu)建FUT4近端啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列熒光蟲熒光素酶報告基因表達(dá)載體，為利用光素酶報告基因檢測系統(tǒng)研究FUT4近端啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的分布及其性質(zhì)提供了基本實(shí)驗(yàn)條件。質(zhì)粒，為進(jìn)一步研究FUT4基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
獲獎情況
- 2011年在大連醫(yī)科大學(xué)舉行的第四屆大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競賽中獲得二等獎
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- 維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫 中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)服務(wù)系統(tǒng)（SinoMed)/（CBM）
同類課題研究水平概述
- 近年來,不少學(xué)者致力于研究α1,3-FucT以及Lex、SLex等相關(guān)抗原結(jié)構(gòu)與腫瘤診斷、腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。一些學(xué)者用免疫組化方法,用抗SLex和Lex等相關(guān)結(jié)構(gòu)的單克隆抗體發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸腫瘤組織中有Lex、Ley的大量堆積,而在正常成人結(jié)腸組織中不表達(dá)或很少表達(dá).Kazuhiro等用Northern Blotting、RT-PCR和FACS技術(shù)測得在15株上皮細(xì)胞癌細(xì)胞系中有14株表達(dá)SLex結(jié)構(gòu),8株表達(dá)SLea。其中14株細(xì)胞系中能檢測到Fuc-TⅢ的mRNA,與SLex在細(xì)胞表面的表達(dá)相一致。另外,在大多數(shù)被檢上皮癌細(xì)胞系中都能測得FucTⅣ、FucTⅥ的mRNA,所有被檢的白血病細(xì)胞系細(xì)胞表面表達(dá)SLex結(jié)構(gòu),且都能檢測到FucTⅣ的mRNA。Kimura等成功地建立了一株α1,3-FucTⅢ的單克隆抗體。用此抗體進(jìn)行正常結(jié)腸組織和結(jié)腸腫瘤組織的免疫組化染色,結(jié)果表明:在正常結(jié)腸組織中,FucTⅢ表達(dá)很少,而在結(jié)腸腫瘤組織中,FucTⅢ呈現(xiàn)大量增強(qiáng)的表達(dá),呈分散的、隨機(jī)的分布。SLex和SLea抗原作為腫瘤相關(guān)抗原,它們在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)水平還與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。腫瘤組織的轉(zhuǎn)移灶表面比原發(fā)灶含有更多的SLex.本教研究曾用α1,3-FucTⅢ、Ⅴ、Ⅵ基因的探針研究肝癌中α1,3-FucT表達(dá)的情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),人的α1,3-FucTⅢ、Ⅴ、Ⅵ的表達(dá)由癌旁組織、原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶逐漸增強(qiáng),而且差別顯著。大多數(shù)腫瘤患者血清和腫瘤組織中α1,3-FucT酶活力大大增加。腫瘤患者血清中α1,3-FucT酶的活力水平還與癌癥的進(jìn)程、癌癥灶的大小有關(guān)。有效地治療以后,可使血清中α1,3-FucT酶活力下降。目前,Obama等已成功地建立了一株α 1,3/1,4-FucTⅢcDNA的轉(zhuǎn)基因小鼠,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在這株小鼠的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、肝竇狀隙毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和心臟毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中有Lex的大量表達(dá),另外,SLex、SLea在腎小球內(nèi)皮細(xì)胞中也大量表達(dá)。因此,轉(zhuǎn)基因小鼠的建立對于腫瘤發(fā)生、炎癥反應(yīng)和傷口愈合這些生理、病理過程中糖復(fù)合物所起的作用的研究,提供了一個良好的模型. 隨著人們對糖復(fù)合物在生命活動中的重要性的認(rèn)識的深入和現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的蓬勃發(fā)展,這個領(lǐng)域的研究將成為一個熱點(diǎn)。
