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基本信息
- 項(xiàng)目名稱(chēng)：
- 反義寡核苷酸對(duì)人卵巢癌細(xì)胞HO-8910的抑制作用
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類(lèi)：
- 生命科學(xué)
- 大類(lèi)：
- 自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文
- 簡(jiǎn)介：
- 依據(jù)與miRNA序列互補(bǔ)的原理，設(shè)計(jì)反義寡核苷酸，人工合成并全硫代修飾，在LipofectamineTM 2000介導(dǎo)下，轉(zhuǎn)染卵巢癌HO-8910細(xì)胞。采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的作用和最佳作用濃度。 結(jié)果顯示反義寡核苷酸有效抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，作用的最佳濃度是0.3μmol／L,同時(shí)也顯示從轉(zhuǎn)染卵巢癌HO-8910細(xì)胞24 h開(kāi)始，反義寡核苷酸組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，抑制效應(yīng)持續(xù)到72h。
- 詳細(xì)介紹：
- MicroRNA是新近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)內(nèi)源性小分子RNA家族，主要作用于基因轉(zhuǎn)錄后水平，對(duì)生物體諸多生命現(xiàn)象起重要的調(diào)控作用，特別是在腫瘤的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，發(fā)揮著類(lèi)似癌基因或抑癌基因的功能.miRNAs普遍存在于真核細(xì)胞中, 進(jìn)化上高度保守, 是一類(lèi)約22 nt的內(nèi)源性單鏈RNA分子, 作用于靶mRNA導(dǎo)致其降解或抑制其翻譯, 在動(dòng)物和植物中均對(duì)基因表達(dá)起重要的負(fù)調(diào)控作用。因此我們檢測(cè)了以microRNA-30b為靶標(biāo)的反義寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotide，AMO)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞HO-8910的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，為卵巢癌的miRNA干擾治療的新靶標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 依據(jù)與miRNA序列互補(bǔ)的原理，設(shè)計(jì)反義寡核苷酸，人工合成并全硫代修飾，在LipofectamineTM 2000介導(dǎo)下，轉(zhuǎn)染卵巢癌HO-8910細(xì)胞。采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的作用和最佳作用濃度。結(jié)果顯示反義寡核苷酸有效抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，分別與隨機(jī)組、空白對(duì)照組、脂質(zhì)體對(duì)照組進(jìn)行比較有顯著差異(P<0．05)，反義寡核苷酸作用的最佳濃度是0.3μmol／L。臺(tái)盼藍(lán)拒染法結(jié)果也顯示從轉(zhuǎn)染卵巢癌HO-8910細(xì)胞24 h開(kāi)始，反義寡核苷酸組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，抑制效應(yīng)持續(xù)到72h。
作品專(zhuān)業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- MicroRNA是一類(lèi)內(nèi)源性小分子RNA,作用于基因轉(zhuǎn)錄后水平,調(diào)控基因表達(dá)。因眾多miRNA在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，利用有效抑制基因表達(dá)的方法是否會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生影響是我們感興趣的。用反義技術(shù)抑制目的基因表達(dá)是一種較理想選擇。根據(jù)現(xiàn)有研究數(shù)據(jù)，miRNA-30b在卵巢癌細(xì)胞中高表達(dá)，故設(shè)計(jì)出針對(duì)它的反義寡核苷酸，來(lái)作用于卵巢癌HO-8910細(xì)胞，觀察其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，以尋找卵巢癌治療新靶點(diǎn)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 科學(xué)性:通過(guò)研究對(duì)microRNA-30b的反義寡核苷酸序列設(shè)計(jì)與合成,用來(lái)作用于卵巢癌HO-8910細(xì)胞，觀察其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制,符合科學(xué)研究規(guī)范。先進(jìn)性:以卵巢癌中高表達(dá)的miRNA-30b為研究對(duì)象，是迄今首次在卵巢癌 細(xì)胞中觀察其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。獨(dú)特性:通過(guò)對(duì)miRNA-30b的反義寡核苷酸序列設(shè)計(jì)與合成，探討其在卵巢癌中功能。為進(jìn)一步了解其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中所起作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- miRNA與多種腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。有的有抑癌作用，有的則有促癌功能。miRNA在各種腫瘤中表達(dá)水平不同，且不同腫瘤中有特定表達(dá)模式，說(shuō)明腫瘤發(fā)生與其表達(dá)存在相關(guān)性，并在腫瘤治療中有重要作用及良好前景。以miRNA為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的基因藥物可以為腫瘤基因治療提供一條新途徑，這既是一項(xiàng)篩選抗腫瘤反義核酸藥物的技術(shù)，也是探討其在卵巢癌中功能的重要手段，為進(jìn)一步了解其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中所起作用奠定基礎(chǔ)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：探討以miRNA-30b為靶標(biāo)的反義寡核苷酸AMO對(duì)卵巢癌HO-8910細(xì)胞生長(zhǎng)抑制效應(yīng)。方法：依據(jù)與miRNA序列互補(bǔ)原理設(shè)計(jì)AMO，人工合成并全硫代修飾，在LipofectamineTM2000介導(dǎo)下，轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞。用臺(tái)盼藍(lán)拒染檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用和最佳作用濃度。結(jié)果：染色結(jié)果顯示AMO有效抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，分別與隨機(jī)組、空白組、脂質(zhì)體組進(jìn)行比較有顯著差異P小于0．05，AMO作用的最佳濃度是0.3μmol每升，也顯示從轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞24 h開(kāi)始，AMO組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，抑制效應(yīng)持續(xù)到72h。結(jié)論：以miRNA-30b為靶標(biāo)的AMO可有效抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)。
獲獎(jiǎng)情況
- 2011年4月在大連醫(yī)科大學(xué)第五屆大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品大賽中獲得三等獎(jiǎng)
鑒定結(jié)果
- 無(wú)
參考文獻(xiàn)
- [1]David P.Bartel.Cell 2009,136(23):215-233 [2]Schmittgen TD.Cell Mol Med 2008,12(5B):1811-1819 [3]Socct GK,et al. Cancer Res 2006,66(3):1277-1281 [4]Foekens JA,et al.PNAS 2008,105(35):13021-13026 [5]Ramiro Garzon, et al.Blood 2008, 111:3183-3189. [6] Yukiharu Hiyoshi,et al.Clin Cancer Res 2009,15(6):1915-1922 [7] Volinia S,et al.PNAS 2006, 103(7):2257-2261. [8]. Zhang L, et al.PNAS 2006, 103(24): 9136-9141.
同類(lèi)課題研究水平概述
- 目前，miRNA在卵巢腫瘤的研究尚處于起步階段。主要包括 miRNA 在卵巢腫瘤的表達(dá)檢測(cè)；miRNA 與卵巢腫瘤的發(fā)生、分化、預(yù)后的相關(guān)性及其機(jī)制的研究；以及 miRNA 在卵巢腫瘤的診斷、治療等應(yīng)用方面的探索。 基于 miRNA 的卵巢腫瘤治療，采用以合成的 miRNA 為工具，靶向作用于腫瘤相關(guān)基因。 Tsuda 等報(bào)道，合成的 miR-14U等3種miRNA（以HER-2 的編碼mRNA為靶基因的miRNA）轉(zhuǎn)染入SKOV3細(xì)胞后，能抑制 HER-2 蛋白的表達(dá)，并有效減少 SKOV3 細(xì)胞。后來(lái)又發(fā)現(xiàn)合成的 Gli-1-miRNA-3548 （以膠質(zhì)瘤伴隨抗原1的編碼 mRNA 為靶基因的 miRNA）轉(zhuǎn)染 Gli-1+卵巢腫瘤細(xì)胞后，可以阻斷Shh（Sonic Hedgehog）信號(hào)通路，明顯抑制 Gli-1+卵巢腫瘤細(xì)胞增殖。這都預(yù)示著基于 miRNA 的靶向治療可能是今后卵巢腫瘤基因治療的新途徑。 正因?yàn)槿绱耍菊n題通過(guò)針對(duì)microRNA-30b的反義寡核昔酸序列(AMO)設(shè)計(jì)與合成，用它來(lái)作用于卵巢癌HO-8910細(xì)胞，為腫瘤基因治療提供了一條新途徑。這既是一項(xiàng)篩選抗腫瘤反義核酸藥物的技術(shù)，也是探討miRNA在卵巢癌中功能的重要手段，為進(jìn)一步了解其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中所起的作用奠定基礎(chǔ)。
