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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 蝎毒多克隆抗體的制備以及入腦成分的檢測(cè)
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 實(shí)驗(yàn)使用自制的蝎毒多克隆抗體特異性識(shí)別的蝎毒進(jìn)入小鼠腦部的成分，從而獲得蝎毒中對(duì)于大腦起作用的成分。
- 詳細(xì)介紹：
- 本實(shí)驗(yàn)通過制備蝎毒的多克隆抗體，針對(duì)性地識(shí)別蝎毒中的多種蛋白成分，并進(jìn)行了抗體的多步純化。實(shí)驗(yàn)中設(shè)定了長(zhǎng)期注射蝎毒的實(shí)驗(yàn)組和注射生理鹽水的空白組，獲得兩組的大腦總蛋白進(jìn)行免疫印跡，從而識(shí)別出進(jìn)入小鼠腦部的蛋白成分，可以進(jìn)行后續(xù)的鑒定工作。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本課題為了探討蝎毒對(duì)該類神經(jīng)疾病的治療機(jī)制以及尋找并分離有效神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)成分。本實(shí)驗(yàn)擬通過制備蝎毒的多克隆抗體，運(yùn)用蛋白免疫印跡的方法，特異地顯示出蝎毒成分在小鼠大腦中的分布，從而尋找到蝎毒進(jìn)入大腦并且對(duì)腦部起到一定的刺激營(yíng)養(yǎng)作用的有效成分，為最終確定蝎毒的有功能成分奠定基礎(chǔ)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 蝎子是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥。全蝎的藥用有效部分是蝎毒，蝎毒對(duì)于多種腦神經(jīng)疾病有治療作用，然而對(duì)其機(jī)制研究尚待完善。本課題自制蝎毒多克隆抗體，通過蛋白免疫印跡的方法，特異性顯示進(jìn)入大腦的蝎毒蛋白，為進(jìn)一步質(zhì)譜分析定性蛋白奠定了基礎(chǔ)，利用這種方法進(jìn)一步尋找蝎毒中的有效成分，這是本實(shí)驗(yàn)的獨(dú)特之處。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 探索蝎毒對(duì)神經(jīng)退行性疾病的治療作用的機(jī)制，為給類疾病的藥物研發(fā)提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。從蝎毒中得到單一成分或者簡(jiǎn)單混合物的有效活性成分。以期進(jìn)一步擴(kuò)大蝎毒的臨床應(yīng)用市場(chǎng)，加快對(duì)其的研究，開發(fā)和利用，制成高效低毒的新型制劑，更好地服務(wù)于社會(huì)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 利用自制的兔抗蝎毒抗體，運(yùn)用蛋白免疫印跡的方法來特異地顯示出蝎毒成分在小鼠大腦中的分布。制備兔抗蝎毒的多克隆抗體，并通過雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)測(cè)定抗體效價(jià)。設(shè)置對(duì)照組和長(zhǎng)期注射蝎毒的小鼠實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行大腦蛋白的蛋白免疫印跡（Western-blotting），從而尋找到進(jìn)入大腦的蝎毒有效成分。通過雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)，得到制備的兔抗蝎毒的多克隆抗體，效價(jià)為1:150.通過Western-blotting特異性識(shí)別進(jìn)入大腦的蝎毒成分，進(jìn)行質(zhì)譜鑒定的定性分析，并進(jìn)行純化分離。通過本課題探索蝎毒對(duì)神經(jīng)退行性疾病的治療作用的機(jī)制，為給類疾病的藥物研發(fā)提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
獲獎(jiǎng)情況
- 第五屆大連醫(yī)科大學(xué)科技創(chuàng)新比賽 二等獎(jiǎng)
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- 免疫學(xué)雙語實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)，【M】北京：科學(xué)出版社 東亞鉗蝎蝎毒蛋白的免疫學(xué)【J】研究河北農(nóng)工業(yè)技術(shù)示范學(xué)院學(xué)報(bào) 雙線觀點(diǎn)用及質(zhì)譜分析與蛋白質(zhì)組研究【J】第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào) 蝎毒的采集，提取，分離，鑒定研究【J】，中成藥 應(yīng)用高效液相色譜法比較我國(guó)不同地區(qū)東亞鉗蝎毒【J】，沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)， 蝎毒的采集，提取，分離，鑒定研究【J】，中成藥
同類課題研究水平概述
- 根據(jù)文獻(xiàn)的報(bào)道，張景海等用Glaspac Column TSK G3000 SW膠過濾，離子交換高效液相色譜分離我國(guó)不同地區(qū)東亞鉗蝎種類及含量。王琳等則首次分離純化出分子量在2萬以上的蝎毒蛋白，打破了以往國(guó)內(nèi)外對(duì)蝎毒的研究報(bào)道均認(rèn)為蝎毒是多肽的混和物 ，說明了蝎毒的化學(xué)成分是復(fù)雜的，蝎毒的廣泛藥理學(xué)性質(zhì)可能與這些不同的成分有關(guān)。在國(guó)內(nèi)外對(duì)于蝎毒在神經(jīng)疾病方面的應(yīng)用的研究也分布在癲癇，鎮(zhèn)痛和神經(jīng)退行性病變?nèi)缋夏臧V呆和帕金森疾病。
