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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- TGEV、PEDV二重RT-PCR檢測(cè)技術(shù)的建立及其在閩西地區(qū)TGE、PED感染率調(diào)查中的應(yīng)用
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 為更好的預(yù)防和控制仔豬豬傳染性胃腸炎（TGE）和豬流行性腹瀉（PED），本試驗(yàn)建立了能同時(shí)檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒( TGEV)和豬流行性腹瀉病毒( PEDV)的二重RT-PCR 檢測(cè)技術(shù)，并應(yīng)用其開展閩西地區(qū)TGE及PED的流行病學(xué)調(diào)查。
- 詳細(xì)介紹：
- 為更好的預(yù)防和控制仔豬豬傳染性胃腸炎（TGE）和豬流行性腹瀉（PED），本試驗(yàn)建立了能同時(shí)檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒( TGEV)和豬流行性腹瀉病毒( PEDV)的二重RT-PCR 檢測(cè)技術(shù)，并應(yīng)用其開展閩西地區(qū)TGE及PED的流行病學(xué)調(diào)查。根據(jù)GenBank 收錄的PEDV M 基因和TGEV N 基因序列，設(shè)計(jì)合成能分別特異性擴(kuò)增TEGV和PEDV相應(yīng)基因的引物，擴(kuò)增目的帶分別為252 bp和540 bp。在優(yōu)化RT-PCR反應(yīng)條件、進(jìn)行敏感性試驗(yàn)和特異性試驗(yàn)等基礎(chǔ)上, 建立了能同時(shí)檢測(cè)TGEV和PEDV的方法。應(yīng)用該方法檢測(cè)了閩西地區(qū)63個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，共計(jì)108份臨床癥狀疑似豬TEG和PED的糞便及組織樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示TEGV平均陽(yáng)性率為25.0%（27/108）；PEDV平均陽(yáng)性率為14.8%（16/108）；混合感染平均陽(yáng)性率為7.4%（8/108)。結(jié)果表明閩西地區(qū)存在豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉流行隱患，應(yīng)引起足夠重視。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 豬傳染性胃腸炎（TGE）和豬流行性腹瀉（PED）是兩種最主要的豬病毒性腹瀉，已成為造成豬場(chǎng)損失的最為重要的原因之一。流行在近年呈現(xiàn)持續(xù)上升的趨勢(shì)，它而在以及其他病毒性混合感染。本文通過建立豬傳染性胃腸炎病毒及豬流行性腹瀉病毒二重PCR檢測(cè)技術(shù)，為TGE及PED的快速診斷提供技術(shù)支撐，同時(shí)將其應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)查，為該病的防控提供有力的參考依據(jù)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- TGE和PED的診斷方法中,近年來發(fā)展起來RT-PCR法是目前研究的重點(diǎn)，其具有快速、特異等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)己經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜禽傳染病的診斷。常規(guī)單相RT-PCR方法，不能在同一體系中同時(shí)檢測(cè)出TGEV與PEDV。TGEV和PEDV二重RT-PCR檢測(cè)方法，比常規(guī)PCR更方便、更快速，提供可靠的和敏感的手段。在PED及TGE流行病學(xué)調(diào)查方面，尚未見有閩西地區(qū)PED及TGE流行病學(xué)調(diào)查的報(bào)道。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 通過TGEV、PEDV二重RT-PCR檢測(cè)技術(shù)的建立，對(duì)閩西不同地區(qū)、豬不同生長(zhǎng)階段的TGE及PED感染率分布情況關(guān)系的研究。通過本試驗(yàn)研究，了解和闡述閩西地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的的TGE及PED的主要流行情況，從而為控制疾病、降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)提供依據(jù)，同時(shí)對(duì)常見豬病的流行特征和臨床癥狀提供素材，這為閩西地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)診斷、預(yù)防和控制TGE和PED提供有價(jià)值的信息。對(duì)閩西地區(qū)的養(yǎng)豬業(yè)健康、可持續(xù)發(fā)展具有重要的指導(dǎo)意義
學(xué)術(shù)論文摘要
- 為更好的預(yù)防和控制仔豬豬傳染性胃腸炎（TGE）和豬流行性腹瀉（PED），本試驗(yàn)建立了能同時(shí)檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒( TGEV)和豬流行性腹瀉病毒( PEDV)的二重RT-PCR 檢測(cè)技術(shù)，并應(yīng)用其開展閩西地區(qū)TGE及PED的流行病學(xué)調(diào)查。根據(jù)GenBank 收錄的PEDV M 基因和TGEV N 基因序列，設(shè)計(jì)合成能分別特異性擴(kuò)增TEGV和PEDV相應(yīng)基因的引物，擴(kuò)增目的帶分別為252 bp和540 bp。在優(yōu)化RT-PCR反應(yīng)條件、進(jìn)行敏感性試驗(yàn)和特異性試驗(yàn)等基礎(chǔ)上, 建立了能同時(shí)檢測(cè)TGEV和PEDV的方法。應(yīng)用該方法檢測(cè)了閩西地區(qū)63個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)，共計(jì)108份臨床癥狀疑似豬TEG和PED的糞便及組織樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示TEGV平均陽(yáng)性率為25.0%（27/108）；PEDV平均陽(yáng)性率為14.8%（16/108）；混合感染平均陽(yáng)性率為7.4%（8/108)。結(jié)果表明閩西地區(qū)存在豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉流行隱患，應(yīng)引起足夠重視。
獲獎(jiǎng)情況
- 無(wú)
鑒定結(jié)果
- 本試驗(yàn)采用TGEV、PEDV二重RT-PCR技術(shù)調(diào)查閩西地區(qū)TGE和PED的感染率，對(duì)生豬疫病的診斷、預(yù)防和控制具有一定的參考價(jià)值，有利于促進(jìn)我市生生豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
參考文獻(xiàn)
- [1]Saif L J，Wesley R D，and Leman A D.1992，Transmissible gastroenteritis virus in: Disease of swine，7th edition，Iowa State University press [2]喻明成等.豬流行性腹瀉診斷方法的研究進(jìn)展 [3]方立等.豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒的RT-PCR鑒別診斷 [4]李敬雙等.豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒二聯(lián)RT-PCR檢測(cè)方法的建立 [5]黃海龍等.豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉診斷方法研究進(jìn)展 等
同類課題研究水平概述
- TGE是豬的一種高度接觸性腸道傳染病，發(fā)病急，傳播快，各種年齡的豬只都可以感染，以引起7～10日齡以內(nèi)仔豬嘔吐、嚴(yán)重腹瀉和高死亡率為特征。本病最初于1945年發(fā)生在美國(guó)，1946年由此Doyle和Hutchings首次報(bào)道。之后英國(guó)、日本在1958年報(bào)道發(fā)生了TCE。從那時(shí)起，許多歐洲國(guó)家、中南美洲、加拿大、臺(tái)灣省、朝鮮、菲律賓和我們中國(guó)都報(bào)道了本病。我國(guó)最早發(fā)現(xiàn)本病是1956年在廣東省揭陽(yáng)、惠來和汕頭市的幾個(gè)豬倉(cāng)庫(kù)中。1956年本病在我國(guó)廣東省發(fā)現(xiàn)后，山東、天津、遼寧、甘肅、河北、山西、陜西等各地陸續(xù)發(fā)現(xiàn)本病。1987～1989年全國(guó)疫病普查，TGE在全國(guó)各地普遍存在，發(fā)病數(shù)仍居高不下，據(jù)21個(gè)省、市、自治區(qū)的統(tǒng)計(jì)，共發(fā)病豬2350.61萬(wàn)頭，死亡36.14萬(wàn)頭，平均發(fā)病率為1.61%，死亡率為0.025%。發(fā)病率以四川和海南省為最高4.48%和4.37%，其次是福建和廣東省2.94%和2.89%，其它省發(fā)病率在0.1%～0.55%之間。本病與豬流行性腹瀉的混合感染率也在逐年上升1990年為21.2%，隨后幾年的調(diào)查已上升到30.77%及44.15%。 PED是一種急性、高度接觸性的傳染病，以水樣腹瀉、嘔吐、脫水和新生仔豬的高死亡率為特征。70年代初首先發(fā)現(xiàn)于英國(guó)和比利時(shí)。1976年，暴發(fā)了類似TGE的急性腹瀉，己排除了TGEV作為病原的可能，也不是其它已知腸致病性病原，Wood把這次暴發(fā)的腹瀉稱為腹瀉Ⅱ型，以便與70年代初發(fā)生的腹瀉(稱Ⅰ為型)區(qū)別。1978年P(guān)ensaert等發(fā)現(xiàn)一種類冠狀病毒的病原與Ⅱ型腹瀉暴發(fā)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)表明Ⅰ型和Ⅱ型腹瀉的發(fā)生是由相同的冠狀病毒引起的，故把這種腹瀉稱為豬流行性腹瀉。1973年先后在我國(guó)上海、遼寧、吉林、黑龍江、四川等地分離到TGE和PED病毒抗原。 由于傳染性胃腸炎和流行性腹瀉的臨床表現(xiàn)、病理變化、流行病學(xué)等方面都非常相似，給臨床診斷帶來了一定的困難。診斷這兩種疾病的傳統(tǒng)方法有臨床觀察、病毒分離、顯微病變觀察、熒光抗體檢測(cè)、免疫組織化學(xué)法等。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，對(duì)于PEDV和TGEV核酸的檢測(cè)方法越來越受到重視，核酸探針雜交、反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析等核酸檢測(cè)技術(shù)陸續(xù)應(yīng)用于這兩種病毒的病原檢測(cè)中，RT-PCR方法是目前鑒別診斷TGEV和PEDV最敏感、特異的方法。
