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基本信息
- 項目名稱：
- 趙學(xué)勇
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 本作品介紹了一種在可溶性原核表達載體系統(tǒng)pMAL-p2X表達和純化豬β2m蛋白的方法。作品從pH值、溫度、菌體密度、IPTG濃度、誘導(dǎo)時間等方面對豬β2m在pMAL-p2X的表達條件進行了詳細(xì)研究，并在獲得最佳表達條件的情況下對β2m進行純化。研究結(jié)果顯示在最佳表達條件下，β2m的相對表達含量可達到45%，純化后的融合蛋白純度達到90%以上。本研究為今后開展豬β2m進一步的結(jié)構(gòu)和功能研究奠定基礎(chǔ)。
- 詳細(xì)介紹：
- pMAL-p2X系統(tǒng)是一種可溶性原核表達系統(tǒng)，該系統(tǒng)載體上含有表達麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP，42.5ku)的malE基因，該基因可以誘導(dǎo)外源蛋白至細(xì)胞周質(zhì)中，并以融合蛋白的形式分泌性表達至培養(yǎng)基上清中，因此非常適合于β2m之類的膜外蛋白的表達(Gao等, 2009)。在對β2m進行進一步的結(jié)構(gòu)和功能的研究中，需要大量的表達純化蛋白。本研究中，設(shè)計實驗分別從pH值、溫度、菌體密度、IPTG濃度、誘導(dǎo)時間等條件進行優(yōu)化。表達蛋白經(jīng)過Amylose樹脂柱進行純化。結(jié)果顯示：β2m在pMAL-p2X的最佳表達條件為pH=7.5、T(溫度)=37℃、OD600=0.3、IPTG=0.5mmol/L和t (誘導(dǎo)時間)=5h。在最佳表達條件下?2m的相對表達含量可達到45%。純化后的融合蛋白純度達到90%以上。β2m基因在pMAL-p2X表達條件的優(yōu)化及純化為今后進一步研究β2m晶體結(jié)構(gòu)和相關(guān)功能奠定了基礎(chǔ)。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 豬β2m蛋白的結(jié)構(gòu)仍然未解析，其相關(guān)功能有待于進一步研究。為研究β2m蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，需要準(zhǔn)備大量的表達蛋白，并進行純化。該作品研究了豬β2m蛋白在pMAL-p2X中的表達條件并對蛋白進行了純化，為今后進行β2m蛋白的規(guī)?；a(chǎn)奠定了基礎(chǔ)?；舅悸肥铅?m重組質(zhì)粒鑒定,然后是β2m在pMAL/p2X上最佳表達條件的篩選,最后是β2m在pMAL/p2X上的純化.
科學(xué)性、先進性及獨特之處
- 該作品從涉及目的蛋白表達的pH值、溫度、菌體密度、IPTG濃度、誘導(dǎo)時間等條件進行優(yōu)化，并得到各個條件下的最佳表達條件，并且在最佳表達條件下蛋白的相對表達含量和純化蛋白。作品設(shè)計科學(xué)合理，對于研究其他蛋白的表達條件和蛋白的純化具有借鑒意義。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 該作品提供了一種研究蛋白在可溶性表達體系pMAL-p2X中優(yōu)化表達的方法，同時該方法也可適用于任何表達體系，也適用于研究任何表達蛋白表達條件的優(yōu)化。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 為優(yōu)化β2m在pMAL-p2X的表達。方法：設(shè)計實驗分別從pH值、溫度、菌體密度、IPTG濃度、誘導(dǎo)時間等條件進行優(yōu)化。表達蛋白經(jīng)過Amylose樹脂柱進行純化。結(jié)果:β2m在pMAL-p2X的最佳表達條件為pH=7.5、T(溫度)=37℃、OD600=0.3、IPTG=0.5mmol/L和t (誘導(dǎo)時間)=5h。在最佳表達條件下β2m的相對表達含量可達到45%。純化后的融合蛋白純度達到90%以上。結(jié)論：β2m在pMAL-p2X系統(tǒng)表的表達和純化為進一步研究其結(jié)構(gòu)和功能提供數(shù)據(jù)。
獲獎情況
- 該作品已經(jīng)被全國中文核心期刊《中國畜牧獸醫(yī)》正式接受，發(fā)表于2011年第五期。
鑒定結(jié)果
- 經(jīng)大連大學(xué)團委和素質(zhì)教育基地等有關(guān)部門鑒定，論文發(fā)表情況屬實。該論文已經(jīng)被全國核心期刊《中國畜牧獸醫(yī)》接受，發(fā)表于2011年5月份。
參考文獻
- [1]廖俊偉，張小飛，黃顯明，等. I型鴨肝炎病毒VP3基因的克隆與原核表達 [J]. 動物醫(yī)學(xué)進展, 2009, 30(7):49-52. [2]高鳳山等. 大腸桿菌表達的重組豬β2微球蛋白二級結(jié)構(gòu)的圓二色譜分析[J]. 微生物學(xué)報, 2009, 49(2):1596-600. [3]付薇等. 豬鏈球菌9型cps9G基因的克隆與序列分析[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展,2009, (1):1-4.
同類課題研究水平概述
- 豬β2m屬于豬主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex, MHC)I類分子的輕鏈分子，與重鏈分子非共價鍵結(jié)合形成MHC I類分子(Wang等, 2009)。豬β2m于1993年要由Milland首次測定了核酸序列(Milland等, 1993)，Rogel-Gaillard后來將其定位于1號染色體q17(Rogel-Gaillard等, 1997)。為研究豬β2m的結(jié)構(gòu)和功能，高鳳山等最近克隆豬β2m基因，并在pMAL-p2X載體上進行了表達和二級結(jié)構(gòu)研究(高鳳山等, 2009)。然而，到目前為止，豬β2m在pMAL-p2X系統(tǒng)上的最適表達條件未進行研究。 開展β2m進一步的結(jié)構(gòu)和功能的研究需要大量性狀良好的純化蛋白，本研究是在已有研究基礎(chǔ)上，對β2m蛋白在pMAL-p2X進行進一步的表達條件的優(yōu)化，以得到β2m蛋白在pMAL/p2X上的最佳表達條件，并在此基礎(chǔ)上純化為今后研究β2m的結(jié)構(gòu)和功能奠定基礎(chǔ)。
