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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 枸杞雄性不育相關(guān)蛋白的雙向電泳平臺(tái)建立
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 本項(xiàng)目首次采用了雙向凝膠電泳研究技術(shù)篩選枸杞雄性不育相關(guān)特異性蛋白，對(duì)枸杞雄性不育花藥蛋白研究進(jìn)行雙向電泳平臺(tái)的建立并且優(yōu)化，通過建立不同的蛋白質(zhì)提取方法，蛋白質(zhì)定量，不同lPG膠條pH范圍，不同的染色方法的選擇與比較，最終建立了適合枸杞雄性不育花藥蛋白的雙向電泳平臺(tái)，并且篩選了相關(guān)蛋白，對(duì)后繼的差異蛋白的鑒定及相關(guān)基因的克隆及功能研究有著重要的理論和實(shí)踐意義。
- 詳細(xì)介紹：
- 為了建立適合枸杞雄性不育蛋白質(zhì)組研究的雙向電泳技術(shù)，并且探索適用于枸杞蛋白質(zhì)組學(xué)的樣品制備方法，對(duì)雄性不育枸杞蛋白質(zhì)的提取、IEF、及SDS-PAGE電泳等步驟進(jìn)行了研究，比較了TCA/丙酮沉淀法、改良TCA法兩種蛋白質(zhì)的提取方法及不同染色方法。因此本項(xiàng)目采用雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)枸杞雄性不育材料“YX-1”與可育材料“ 寧杞 1號(hào) ”的葉片和花藥等不同器官蛋白質(zhì)進(jìn)行比較研究，尋找與不育相關(guān)的差異蛋白，為進(jìn)一步對(duì)差異蛋白的鑒定、差異蛋白基因的克隆及功能研究，進(jìn)而探索枸杞雄性不育機(jī)理提供理論依據(jù)。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：通過建立枸杞花藥蛋白的雙向電泳體系，尋找枸杞雄性不育相關(guān)的花藥蛋白，為后繼研究枸杞雄性不育的分子機(jī)理提供基礎(chǔ)。 基本思路：以枸杞雄性不育株“YX-1”與可育株“ 寧杞 1號(hào) ”為材料，通過對(duì)白質(zhì)提取方法，蛋白質(zhì)定量，lPG膠條pH范圍，染色方法的選擇與比較，建立枸杞花藥蛋白2-DE體系，并找到與不育相關(guān)的差異蛋白。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 蛋白質(zhì)是基因的表達(dá)產(chǎn)物，蛋白質(zhì)的差異反映了基因表達(dá)的差異。 本項(xiàng)目首次對(duì)枸杞蛋白質(zhì)組雙向電泳圖譜研究，建立了適合于枸杞花藥蛋白研究的雙向電泳平臺(tái)。獲得了可育株與不育株差異表達(dá)圖譜，為育性相關(guān)基因的克隆及功能研究有有重要的意義。促進(jìn)了寧夏枸杞產(chǎn)業(yè)的綜合開發(fā)利用，也為枸杞雜交育種提供技術(shù)支撐。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 現(xiàn)有的枸杞育種難以滿足生產(chǎn)上對(duì)現(xiàn)有品種大幅度改良的需要，因而迫切需要應(yīng)用高效的育種手段，推進(jìn)枸杞育種工作。雄性不育材料的獲得及研究在雜種優(yōu)勢(shì)研究中可避免人工去雄。利用雙向凝膠電泳技術(shù)，可篩選到育性相關(guān)的蛋白，為進(jìn)一步對(duì)差異蛋白的鑒定、差異蛋白基因的克隆及功能研究，進(jìn)而探索枸杞雄性不育機(jī)理提供理論依據(jù)。促進(jìn)了寧夏枸杞產(chǎn)業(yè)的綜合開發(fā)利用，也為枸杞雜交育種提供技術(shù)支撐。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 為了建立適合枸杞雄性不育蛋白質(zhì)組研究的雙向電泳技術(shù)，并且探索適用于枸杞蛋白質(zhì)組學(xué)的樣品制備方法，對(duì)雄性不育枸杞蛋白質(zhì)的提取、IEF、及SDS-PAGE電泳等步驟進(jìn)行了研究，比較了TCA/丙酮沉淀法、改良TCA法兩種蛋白質(zhì)的提取方法及不同染色方法。結(jié)果顯示：采用改良TCA法可提高提取液中蛋白質(zhì)的含量和雙向電泳圖譜的分辨率，且蛋白點(diǎn)清晰，圖譜分辨率較好；銀染法比考馬斯亮藍(lán)染色法靈敏度高，建立起了一套適用于枸杞花蕾蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳平臺(tái)。項(xiàng)目采用雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)枸杞雄性不育材料“YX-1”與可育材料“ 寧杞 1號(hào) ”的葉片和花藥等不同器官蛋白質(zhì)進(jìn)行比較研究，找到與不育相關(guān)的差異蛋白,對(duì)枸杞花藥蛋白產(chǎn)品進(jìn)行深層次的研究，為進(jìn)一步對(duì)差異蛋白的鑒定、差異蛋白基因的克隆及功能研究，進(jìn)而探索枸杞雄性不育機(jī)理提供理論依據(jù)。促進(jìn)了寧夏枸杞產(chǎn)業(yè)的綜合開發(fā)利用，也為枸杞雜交育種提供技術(shù)支撐。
獲獎(jiǎng)情況
- 本項(xiàng)目獲“2011年4月獲得寧夏大學(xué)生科技創(chuàng)新與人文社會(huì)科學(xué)研究創(chuàng)新項(xiàng)目”優(yōu)秀獎(jiǎng)。 本項(xiàng)目獲“第七屆‘挑戰(zhàn)杯’寧夏大學(xué)學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競賽”二等獎(jiǎng)。
鑒定結(jié)果
- 本項(xiàng)目首次采用了雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)枸杞雄性不育相關(guān)差異蛋白的平臺(tái)進(jìn)行了建立，獲得了不育的相關(guān)蛋白圖譜，篩選和觀察了枸杞不育的相關(guān)蛋白，共計(jì)獲得800個(gè)蛋白點(diǎn)。
參考文獻(xiàn)
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同類課題研究水平概述
- 目前對(duì)枸杞雄性不育材料的形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)（田英，2009；徐青，2009）及生理生化指標(biāo)（米海莉，2008；鄭蕊，2009）等方面進(jìn)行了研究，而運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究雄性不育相關(guān)基因表達(dá)方面在國內(nèi)外尚未見到相關(guān)報(bào)道。本項(xiàng)目采用雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)枸杞雄性不育材料“YX-1”與可育材料“ 寧杞 1號(hào) ”小孢子敗育前后關(guān)鍵時(shí)期的花藥進(jìn)行系統(tǒng)、深入的比較研究。近年來對(duì)枸杞雄性不育的研究主要集中在單向電泳研究，尤其是運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的雙向電泳研究技術(shù)本次項(xiàng)目尚屬首例。
