基本信息
- 項目名稱：
- 單增李斯特菌LAMP檢測試劑盒
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作A類
- 簡介：
- 本作品已經(jīng)建立了一種適合于快速檢測單增李斯特菌的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）方法。以單增李斯特菌LM-CMC54002的iap基因為目標序列，設(shè)計內(nèi)外引物用于LAMP擴增，結(jié)果肉眼可見。靈敏度分析顯示LAMP檢測的靈敏度高出熒光定量PCR10倍。且檢測結(jié)果可通過肉眼直接觀察。這一方法的建立能很好地克服其他檢測手段耗時長，操作繁瑣以及對儀器的依賴等弊端，尤其適用于在基層單位推廣，實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。
- 詳細介紹：
- 單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，簡稱“單增李斯特菌”）屬于李斯特菌屬,其在自然界分布廣泛,是危害公共衛(wèi)生和食品行業(yè)的一種重要人畜共患致病菌，其致病性與多個毒力因子密切相關(guān)。動物性食品是其主要傳播源，可使人畜患腦膜炎、心肌炎、敗血癥、死嬰、早產(chǎn)等疾病，危害較大，死亡率達到20%~30%，在我國香港、福建、遼寧和云南等地有過因該菌引發(fā)疾病而住院或死亡的報道。該菌可在4℃仍可生長，對冷凍產(chǎn)品和速食食品構(gòu)成威脅，包括我國在內(nèi)的很多國家都規(guī)定食物中不得檢出單增李斯特菌，因此建立一種快速、準確有效的檢測單增李斯特菌的檢測方法，是食品安全重要課題之一，有著十分重要的意義。 本作品已經(jīng)建立了一種適合于快速檢測單增李斯特菌的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）方法。以單增李斯特菌LM-CMC54002的iap基因為目標序列，設(shè)計內(nèi)外引物用于LAMP擴增，通過肉眼觀察白色沉淀來判斷檢測結(jié)果。靈敏度分析顯示LAMP檢測單增李斯特菌基因組的靈敏度達到9.6fg/μL，高出熒光定量PCR的檢測限10倍。且檢測結(jié)果可通過肉眼直接觀察。這一方法的建立能很好地克服其他檢測手段耗時長，操作繁瑣以及對儀器的依賴等弊端，尤其適用于在基層單位推廣，實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設(shè)計、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標
- 創(chuàng)新點 本項目擬根據(jù)GenBank中已報道的單增李斯特菌的多個毒力因子序列，設(shè)計一套針對LAMP方法所需要的引物，建立單增李斯特菌LAMP快速檢測方法，開發(fā)一種適合于基層單位推廣應(yīng)用的單增李斯特菌核酸等溫快速擴增的檢測試劑盒。這一方法的建立能很好地克服其他檢測手段耗時長，操作繁瑣以及對儀器的依賴等弊端，尤其適用于在基層單位推廣。 關(guān)鍵技術(shù) 1、單增李斯特菌毒力因子基因片段LAMP擴增引物序列的設(shè)計；2、LAMP擴增條件的優(yōu)化（包括反應(yīng)液的組成、比例和濃度等）； 主要技術(shù)指標 （1）特異性大于98%，假陽性率低于5%；（2）檢測時間在1.5個小時內(nèi)完成；（3）靈敏性：菌落最低檢測限達到10CFU/mL；標本的檢出率達到95%以上；（4）鑒定方法：通過肉眼觀察鑒定，無需電泳等其他任何分析步驟；
科學(xué)性、先進性
- LAMP技術(shù)的特點： 1、操作簡便、不需要PCR儀器；2、特異性強、檢測限更小；3、等溫、耗時短；4、高效；5、產(chǎn)物易檢測。 利用這些特點，建立病原微生物的鑒定檢察方法具有高效率、高特異性、高敏感性等特點，克服了傳統(tǒng)PCR固有的檢測時間長、檢測成本高等缺點。 此外，這種檢測方法對檢測人員的技術(shù)素質(zhì)要求較低，實際操作極為簡便，不需要特殊的儀器設(shè)備。LAMP方法在流行性病毒檢測、臨床診斷等領(lǐng)域的應(yīng)用及研究已有文獻報道，但在水產(chǎn)品中致病微生物檢測方面國內(nèi)外罕見這方面的研究報道。
獲獎情況及鑒定結(jié)果
- 1. 研究結(jié)果已撰寫一篇研究論文（英文，擬投SCI）和專利，待投稿。 《Determination of Listeria monocytogenes in food by loop-mediated isothermal amplification》 2. 單增李斯特菌LAMP試劑盒產(chǎn)品經(jīng)杭州迪恩科技有限公司試用良好。
作品所處階段
- 中試階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 公司試用階段，試用效果好，考慮深入合作。
作品可展示的形式
- 實物展示
使用說明,技術(shù)特點和優(yōu)勢,適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場分析,經(jīng)濟效益預(yù)測
- 項目的技術(shù)特點和優(yōu)勢 LAMP方法的優(yōu)點是靈敏度高，反應(yīng)時間短，臨床使用不需要特殊的儀器，操作簡單，肉眼觀察結(jié)果。 作品的適用性范圍及推廣前景 通過網(wǎng)絡(luò)和到公司與檢測機構(gòu)調(diào)研LAMP檢測方法在食品安全快速檢測中的應(yīng)用前景，市場上常用檢測方法的不足和本作品建立的LAMP檢測方法的便捷、快速特性使得本方法具備良好的市場應(yīng)用前景。 該檢測方法及其試劑盒檢測時間短、檢測成本低、對檢測人員的技術(shù)素質(zhì)要求較低、實際操作極為簡便和不需要特殊的儀器設(shè)備等優(yōu)勢將易于推廣，尤其適用于在基層單位推廣。同時目前市場上還未見有單增李斯特菌LAMP檢測試劑盒產(chǎn)品。因此，本項目其應(yīng)用前景十分廣闊。 市場分析和經(jīng)濟效益預(yù)測 市場分析：本產(chǎn)品實驗操作簡便，特異性強，檢測靈敏度高，耗時時間短，能很好的滿足快速檢測的要求。與市場上同類產(chǎn)品比較有很大的競爭優(yōu)勢。 成果的經(jīng)濟效益預(yù)測：生產(chǎn)成本控制在20元/次檢測，銷售價格控制在40元/次檢測。本項目形成中試規(guī)模至大規(guī)模生產(chǎn)后，經(jīng)濟效益將十分顯著。
同類課題研究水平概述
- 單增李斯特菌的傳統(tǒng)檢測方法包括選擇性培養(yǎng)、生化鑒定等步驟，耗時長、靈敏性差，很難滿足安全快速檢測要求。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，陸續(xù)開發(fā)出了以單增李斯特菌核酸特異性序列為檢測對象的PCR方法、核酸探針方法等分子生物學(xué)方法，從基因水平更準確、靈敏的檢測單增李斯特菌, PCR技術(shù)在檢測食品性致病菌方面得到了廣泛的應(yīng)用。PCR技術(shù)結(jié)合其它技術(shù)又衍生出了許多PCR優(yōu)良術(shù)?，F(xiàn)在應(yīng)用較多有熒光定量PCR技術(shù)、反轉(zhuǎn)錄PCR、多重PCR、巢氏PCR等。這些新的PCR技術(shù)在對單核細胞增生性李斯特菌的檢測上也都得到了一定的應(yīng)用。 LAMP快速檢測方法作為一種新興的核酸檢測手段，具備了許多適合于快速檢測的優(yōu)點。操作簡單，檢測儀器要求低，只需一臺能保持恒定溫度的水浴鍋即可，實驗結(jié)果可直接肉眼觀察進行判斷，整個檢測時間可以在1.5個小時內(nèi)完成，可以建立起一種成本低廉的檢測體系。在食品衛(wèi)生質(zhì)量檢驗、臨床疾病診斷及基因芯片開發(fā)等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。開發(fā)相應(yīng)的診斷試劑盒,有望成為簡易的常規(guī)檢測手段。
