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基本信息
- 項目名稱：
- 芳香避穢類中藥抗流感病毒的篩選研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 中醫(yī)自古有“芳香避穢”的療法。中醫(yī)理論認(rèn)為，氣味可通口、鼻等孔竅入體內(nèi)，調(diào)臟腑，祛病強身?，F(xiàn)代研究也證實：芳香氣味可促進免疫球蛋白的產(chǎn)生，增強抵抗力，也能調(diào)節(jié)新陳代謝。本課題據(jù)此中醫(yī)理論，選用古籍常用的廣藿香、野菊花、防風(fēng)等五味藥為對象，進行抗流感病毒的篩選研究，并對其不同提取部位進行抗流感病毒有效部位篩選研究。本項目的實施，將提供應(yīng)對流感危機的現(xiàn)代中藥，為中藥防治流感提供科學(xué)的依據(jù)。
- 詳細(xì)介紹：
- 一、前言 流感在全球范圍內(nèi)迅速傳播，已成當(dāng)前第一大傳染性疾病，它的防治是我們當(dāng)前面臨的最大問題之一 ，有的化學(xué)藥品雖有療效，但毒副作用大，而中藥是多成分、多途徑和多靶點的作用，且毒副作用小，因此，中藥治療流感有著獨特優(yōu)勢 。而中醫(yī)自古便有“芳香辟穢” 的治療方法。中醫(yī)理論認(rèn)為， 氣味可以通過口、鼻、皮毛等孔竅進入體內(nèi)，進而影響五臟的功能。芳香宜人的氣味可以平衡氣血，調(diào)和臟腑，祛病強身?，F(xiàn)代研究也證實：芳香宜人的氣味分子可以促進人體免疫球蛋白的產(chǎn)生，增強身體抵抗力，同時能調(diào)節(jié)全身新陳代謝，平衡神經(jīng)功能。本課題根據(jù)這一中醫(yī)理論，選用古籍中常用的廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭等五味芳香類藥物為研究對象，進行抗流感病毒作用的篩選研究，并對具有抗流感病毒作用的中藥的不同提取部位進行抗流感病毒有效部位的研究，篩選出其有效部位。 本課題在“芳香避穢”的中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，用現(xiàn)代的技術(shù)和方法，體內(nèi)篩選出具有抗流感病毒作用的芳香性中藥，并對具有抗流感病毒的芳香性中藥的不同提取部位進行有效部位的體內(nèi)抗流感病毒的篩選。 二、研究方案 1．研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題 1.1 研究內(nèi)容及目標(biāo) 本課題根據(jù)這“芳香辟穢”一中醫(yī)理論，選用古籍中常用的廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭等五味芳香類藥物為研究對象，進行抗流感病毒作用的篩選研究，并對具有抗流感病毒作用的中藥的不同提取部位進行抗流感病毒有效部位的研究，篩選出其有效部位。 2．?dāng)M采取的研究方法、技術(shù)路線、實驗方案及可行性分析 2.1芳香性中藥的抗病毒的篩選 2.1.1受試藥物 廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭、莪術(shù),病毒唑。 2.1.2 實驗動物 NIH小鼠，SPF級，雌雄各半，體重13-15g。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫23?2℃，相對濕度為75?10%。 2.1.3 實驗病毒 甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株由廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱研所病毒室提供，給小鼠增強毒力后，于雞胚尿囊腔傳代2次。并測定其半數(shù)致死量，-70℃保存，用前流水浸融。 2.1.4實驗儀器 Sanyo日本；精密電子分析天平，F(xiàn)A/JA系列，上海良平儀器儀表有限公司；乙醚，天津化學(xué)試劑有限公司；0.9%生理鹽水，開開緣生物制藥有限公司；平皿、解剖剪，眼科鑷，一次性注射器等。 2.1.五味芳香類中藥體內(nèi)抗H1N1流感病毒的篩選研究 （1）五味芳香類中藥對小鼠H1N1流感病毒性肺炎的影響 將小鼠隨機分成正常對照組、陽性藥物組（病毒唑）、病毒對照組（即模型組）、廣藿香提取物組、野菊花提取物組，防風(fēng)提取物組、佩蘭提取物組、莪術(shù)提取物組，除正常對照組外，每組10只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株15個LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1 d開始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4 d，病毒感染對照組以等體積蒸餾水灌胃。第5天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實變的程度，摘取全肺稱重，與體重計算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)與抑制率。 肺指數(shù)=（鼠肺重/小鼠體重）*100% 肺指數(shù)抑制率=（對照組平均肺指數(shù)-實驗組平均肺指數(shù)）/對照組平均肺指數(shù)*100%。 （2）五味芳香類中藥對H1N1型流感病毒小鼠的死亡保護實驗 把小鼠隨機分成陽性藥物組（病毒唑）、病毒對照組（即模型組）、廣藿香提取物組、野菊花提取物組，防風(fēng)提取物組、佩蘭提取物組、莪術(shù)提取物組，每組15只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株5個LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1d開始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)12d，病毒感染對照組以等體積蒸餾水灌胃。逐日觀察動物發(fā)病癥狀與死亡數(shù)，共觀察15d。計算死亡率、保護率、平均存活天數(shù)及生命延長率。 死亡保護率=（病毒對照組死亡率—死亡組死亡率）/病毒對照組死亡率*100% 生命延長率=（試驗組平均存活天數(shù)—-病毒對照組平均存活天數(shù)）/病毒對照組平均存活天數(shù)*100% 2.1.6具有體內(nèi)抗H1N1流感病毒的中藥有效部位的篩選研究 （1）樣品的制備 對具有抗H1N1型流感病毒的芳香性的中藥的不同提取部位進行體內(nèi)的抗病毒的篩選，優(yōu)選藥材，利用 SFE-CO2工藝抽提脂溶性成分 A，；用乙醇作夾帶劑改變 SFE-CO2工藝條件抽提脂溶性成分 B，藥渣用水超聲提取后再用凍干制粉得水溶性成分 C。 （2）不同提取部分對小鼠H1N1流感病毒性肺炎的影響 將小鼠隨機分成正常對照組、陽性藥物組（病毒唑）、病毒對照組（即模型組）、提取物A組、提取物B組，提取物C組，除正常對照組外，每組10只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株15個LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1 d開始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4 d，病毒感染對照組以等體積蒸餾水灌胃。第5天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實變的程度，摘取全肺稱重，與體重計算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)與抑制率。 （3）不同提取部分對H1N1型流感病毒小鼠的死亡保護實驗 小鼠隨機分成正常對照組、陽性藥物組（病毒唑）、病毒對照組（即模型組）、提取物A組、提取物B組，提取物C組，每組15只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株5個LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1d開始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)12d，病毒感染對照組以等體積蒸餾水灌胃。逐日觀察動物發(fā)病癥狀與死亡數(shù)，共觀察15d。計算死亡率、保護率、平均存活天數(shù)及生命延長率。 2.3可行性分析 2.3.1嶺南被歷代醫(yī)家稱為“障疫之地”,尋求一種有效，簡單的抗病毒方法十分必要 芳香性味中藥常用于中藥膠囊或者煎劑，用來治療因病毒而引起的流行性感冒，更能達到防治疾病的作用；而現(xiàn)在大多數(shù)醫(yī)院的室內(nèi)消毒不僅運用現(xiàn)代的紫外消毒和化學(xué)消毒外，更有用芳香藥物，如蒼術(shù)煙熏防治細(xì)菌、病毒。本課題主要進行芳香味藥物的抗病毒的篩選，這對今后的防治醫(yī)學(xué)范疇?wèi)?yīng)該會起到積極性的作用。 2.3.2嶺南醫(yī)家一直致力于研究抗病毒研究，積累了豐富的臨床經(jīng)驗 南粵一直以來都是世界流感流行的疫源之一，2003年的第一例非典型肺炎（SARS）在廣東首次發(fā)下，2005年禽流感首次感染人類發(fā)生在香港，在于病毒做持久站的嶺南醫(yī)家，在抗病毒研究領(lǐng)域有著豐富的臨床用藥經(jīng)驗，形成了一整套獨特的抗病毒體系。本次研究所用的芳香藥物，一直以來都被多數(shù)醫(yī)家關(guān)注，而且組方療效確切。 2.3.3廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心申報了多個抗流感病毒的專利，有條件落實本項研究的具體項目 廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心一直以來專注于抗病毒的研究，以建立完善的體內(nèi)、體外的病毒篩選方法，可以為本次研究提供必要的技術(shù)與理論支持。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 通過查閱古籍和相關(guān)文獻及借鑒現(xiàn)代醫(yī)家對防治流感病毒的經(jīng)驗，選擇常用于防治流感病毒的具有芳香性中藥為研究對象，用超臨界萃取等方法進行提取，得到芳香藥物的不同提取部位，采用體內(nèi)抗病毒篩選實驗方法，篩選出具有抗流感病毒作用的有效部位。課題的主要目的是為深入研究中藥抗流感病毒的作用機制奠定基礎(chǔ)，為中藥安全、科學(xué)的應(yīng)用于防治流感提供科學(xué)依據(jù)，實現(xiàn)中藥的現(xiàn)代化。
科學(xué)性、先進性及獨特之處
- 以“芳香辟穢”中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，用超臨界萃取等科學(xué)方法和先進儀器，選芳香藥物不同提取部位進行抗病毒研究，篩選出有效部位。根據(jù)古籍記載和現(xiàn)代醫(yī)家防治流感的經(jīng)驗，選常用芳香性中藥來研究，使實驗具有可行性，且此次研究可作為有效部位體內(nèi)篩選的模板，且中藥有多成分、多途徑和多靶點的作用，毒副作用小，因此，中藥治療流感有著獨特優(yōu)勢。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 嶺南被歷代醫(yī)家稱為“障疫之地”,尋求一種有效，簡單的抗病毒方法十分必要。芳香性中藥抗病毒療效確切，不僅能治療流行性感冒，更能防治疾病；化學(xué)藥雖療效好，但毒副作用大，而中藥是多成分、多途徑和多靶點作用，且毒副作用小，因此中藥治療流感有獨特優(yōu)勢 。本課題對芳香味藥物進行篩選，篩選出廣藿香和野菊花的有效部位；本項目的實施，將提供應(yīng)對流感危機的現(xiàn)代中藥，為中藥安全、科學(xué)的應(yīng)用于防治流感提供科學(xué)依據(jù)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：對廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭、莪術(shù)五味芳香類中藥進行抗H1N1流感病毒的篩選研究，并對篩選出具有抗H1N1流感病毒中藥的不同提取部位進行有效部位研究。方法：通過建立小鼠H1N1流感病毒性肺炎模型和小鼠死亡模型，篩選出廣藿香、野菊花、防風(fēng)等五味藥芳香類中藥中具有抗流感病毒作用的中藥，并研究具有抗流感病毒中藥的不同提取部位對小鼠肺指數(shù)和死亡保護的影響，確定抗流感病毒的有效部位。結(jié)果：與病毒對照組比較，廣藿香能明顯降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指數(shù)（P<0.01）、野菊花能降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指數(shù)（P<0.05），其他幾味中藥作用不顯著。不同提取部位的研究中，廣藿香提取物A (廣藿香油部位)和野菊花提取物A能顯著降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指數(shù)（P<0.01）；廣藿香提取物A (廣藿香油部位)能顯著延長生存時間（P<0.01），廣藿香提取物B、野菊花提取物A能延長生存時間（P<0.05），其余各組均能延長生存時間，但與正常對照組比較無明顯差異。結(jié)論：廣藿香提取物A(廣藿香油部位)、廣藿香提取物B和野菊花提取物A具有一定的抗H1N1流感病毒的作用。
獲獎情況
- 2011年，《廣藿香不同提取部位體內(nèi)抗流感病毒作用研究》發(fā)表在《時珍國醫(yī)國藥》雜志上。
鑒定結(jié)果
- 本課題篩選出廣藿香和野菊花具有抗流感病毒作用，并對其不同提取部位進行抗流感病毒研究，篩選出廣藿香提取物A(廣藿香油部位)、廣藿香提取物B和野菊花提取物A具有抗流感病毒的作用。
參考文獻
- [1].任守忠，靳德軍，張俊清，等. 廣藿香藥理作用研究進展[J].中國現(xiàn)代中藥，2006,8（8）：27. [2]嚴(yán)銀芳等.石香薷揮發(fā)油對流感病毒的抑制作用[J]. 微生物學(xué)雜志2002年1月第22卷第1期. [3]夏泉等. 莪術(shù)油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒作用的實驗研究[J]. 中國藥理學(xué)通報, 2004年03月20日（3）. [4]胡興昌,鄭偉強．板藍根粗提液抑制流感病毒的實驗研究[J]．上海師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2003，32(1)：62． [5]胡克杰,孫考祥，王璐,等．綠原酸體外抗病毒作用研究[J]．哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2001，35(6)：430．
同類課題研究水平概述
- 目前抗流感病毒藥物分為兩類：一是臨床常用的抗流感病毒西藥。其又包括了M2離子通道蛋白抑制劑和神經(jīng)氨酸酶(NA)抑制劑。M2離子通道蛋白抑制劑是長期以來惟一的一類抗流感病毒藥物，包括1966年上市的金剛和1987年上市的金剛乙胺。金剛烷胺和金剛乙胺可以通過阻斷M2離子通道蛋白阻止病毒脫殼，使病毒RNA不能釋放到細(xì)胞質(zhì)中，病毒的早期復(fù)制被中斷，從而起到抗流感病毒的作用。神經(jīng)氨酸酶(NA)抑制劑20世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)了流感A和B型病毒NA的晶體結(jié)構(gòu)，直到1983年才首次公布了流感A和B各亞型病毒NA的共有保守序列，繼而通過計算機輔助設(shè)計，成功的合成出2個NA抑制劑扎那米韋和奧司他，兩藥于1999年幾乎同時上市，為漫長的抗流感病毒藥物研究開創(chuàng)了新紀(jì)元。其優(yōu)點在于高效、低毒、極少產(chǎn)生耐藥性，而且對A和B各亞型流感病毒均有效。扎那米韋與奧司他韋都為唾液酸類似物，以酶和底物的作用形式與NA中的保守序列結(jié)合而使NA失活。鹽酸嗎琳胍(病毒靈)，利巴韋林(病毒唑)和阿比朵爾也是我國臨床常用的抗流感病毒藥物。二是抗流感病毒的中藥。其又包括了抗流感病毒的單味中藥和復(fù)方中藥或中成藥?？沽鞲胁《镜膯挝吨兴幯芯看蠖鄶?shù)為清熱解毒類中藥，所含成分復(fù)雜，目前已經(jīng)研究比較清楚的成分主要有兩類：一類是多酚類物質(zhì)，不僅可以抑制流感病毒蛋白質(zhì)和RNA合成，同時也可抑制流感病毒的吸附作用；另一類是黃酮類物質(zhì)，它能夠抑制流感病毒唾液酸酶的活性和抑制膜融合作用。胡興昌等用丙酮脫脂提取板藍根生藥的凝集素對流感病毒進行的體外抑制試驗結(jié)果表明，板藍根凝集素對流感病毒具有顯著的直接殺滅作用和預(yù)防作用及較好的治療用，并且抑制流感病毒的效果與板藍根凝集素血凝活性的高低相關(guān)。柴胡對雞胚內(nèi)流感病毒的增殖有顯著抑制作用。 但目前對芳香類藥物的揮發(fā)油成分治療流感的研究并不多：倪文澎等人研究發(fā)現(xiàn)荊芥穗揮發(fā)油具有抗甲型流感病毒的作用。 麻葉千里光揮發(fā)油對呼吸道合胞病毒和單純皰疹病毒I型有顯著抑制作用，能不同程度地延緩副流感病毒、柯薩奇病毒B、腺病毒Ⅲ型和流感病毒致細(xì)胞病變作用。陳建偉等人的實驗以甲型流感病毒滴鼻感染小鼠，觀察神術(shù)散及其組成藥味的不同提取物對甲型流感病毒感染小鼠的保護作用。嚴(yán)銀芳等人通過體內(nèi)外試驗證明石香薷揮發(fā)油對流感病毒的抑制作用。 夏泉等通過體內(nèi),外實驗研究莪術(shù)油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒的作用。
