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基本信息
- 項(xiàng)目名稱(chēng)：
- 冰片對(duì)LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的影響
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類(lèi)：
- 生命科學(xué)
- 大類(lèi)：
- 自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文
- 簡(jiǎn)介：
- 本項(xiàng)目通過(guò)以天然右旋冰片干預(yù)LPS刺激下的THP-1細(xì)胞炎癥模型，并以L929細(xì)胞株檢測(cè)法測(cè)定其TNF-α的分泌量，發(fā)現(xiàn)冰片干預(yù)下可使LPS致炎的巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌量顯著降低，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用機(jī)制可能與抑制巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌有關(guān)。
- 詳細(xì)介紹：
- 本項(xiàng)目旨在探討中藥天然右旋冰片對(duì)脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激后的THP-1巨噬細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）的影響。 通過(guò)培養(yǎng)人類(lèi)單核白血病細(xì)胞株——THP-1細(xì)胞，在佛波酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA）作用下分化為巨噬細(xì)胞。以LPS刺激細(xì)胞造炎癥細(xì)胞模型，加入天然右旋冰片進(jìn)行干預(yù)，以地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照，L929細(xì)胞株檢測(cè)法測(cè)定其上清液中TNF-α的含量。 結(jié)果：LPS刺激PMA分化后的THP-1細(xì)胞，其TNF-α含量明顯升高（與正常對(duì)照組相比P<0.01）,冰片干預(yù)下可使LPS致炎的巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌量顯著降低（與炎癥模型組相比P<0.01），可使其分泌量恢復(fù)至正常水平（與正常對(duì)照組相比P>0.05），其作用效果優(yōu)于實(shí)驗(yàn)濃度下的經(jīng)典抗炎藥物——地塞米松（與正常對(duì)照組相比P<0.05）。 結(jié)論：中藥天然右旋冰片可通過(guò)顯著降低LPS刺激下巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌量，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用機(jī)制可能與抑制巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌有關(guān)。
作品專(zhuān)業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- 目的：探討中藥天然右旋冰片對(duì)脂多糖刺激后的THP-1巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的影響。 基本思路：利用人類(lèi)單核白血病細(xì)胞株THP-1細(xì)胞，在 PMA作用22.5h后分化為巨噬細(xì)胞，以LPS刺激細(xì)胞造炎癥細(xì)胞模型，30min后加入天然右旋冰片進(jìn)行干預(yù)，以地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照，作用1h后收集培養(yǎng)上清液，L929細(xì)胞株檢測(cè)法測(cè)定其TNF-α的含量。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 科學(xué)性： 1、L929細(xì)胞株對(duì)TNF-α的敏感性得到科研工作者認(rèn)可；2、實(shí)驗(yàn)中使用陽(yáng)性對(duì)照，有效地評(píng)價(jià)了冰片對(duì)THP-1釋放TNF-α影響；4、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，反復(fù)考察培養(yǎng)環(huán)境及其他影響因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，使結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。 先進(jìn)性與獨(dú)特之處： 1、首創(chuàng)使用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)冰片對(duì)LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的影響
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 1、鑒于冰片在臨床中的大量使用，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以知道臨床用藥； 2、通過(guò)研究數(shù)據(jù)表明，冰片具有較好的抑制巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，可為以后TNF-α的中藥抑制劑開(kāi)發(fā)提供先導(dǎo)化合物； 3、證實(shí)了前人抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果猜想的科學(xué)性。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：探討中藥天然右旋冰片對(duì)脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激后的THP-1巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的影響。 方法：培養(yǎng)人類(lèi)單核白血病細(xì)胞株——THP-1細(xì)胞，在PMA作用下分化為巨噬細(xì)胞。PMA作用22.5h后，以LPS刺激細(xì)胞造炎癥細(xì)胞模型，30min后加入天然右旋冰片進(jìn)行干預(yù)，以地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照，作用1h后收集培養(yǎng)上清液，L929細(xì)胞株檢測(cè)法測(cè)定其TNF-α的含量。結(jié)果：LPS刺激PMA分化后的THP-1細(xì)胞，其TNF-α含量明顯升高,冰片干預(yù)下可使LPS致炎的巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌量顯著降低，可使其分泌量恢復(fù)至正常水平，其作用效果優(yōu)于實(shí)驗(yàn)濃度下的經(jīng)典抗炎藥物——地塞米松。結(jié)論：中藥天然右旋冰片可通過(guò)顯著降低LPS刺激下巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌量，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用機(jī)制可能與抑制巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌有關(guān)。
獲獎(jiǎng)情況
- 無(wú)
鑒定結(jié)果
- 無(wú)
參考文獻(xiàn)
- ［1］王術(shù)玲．小檗堿聯(lián)合厚樸酚對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的干預(yù) ［2］魏楚蓉．冰片的藥理作用及其機(jī)制研究進(jìn)展［4］ 王棋文，宋德榮，李劍勇，等．抗炎藥物及作用機(jī)理最新研究進(jìn)展 ［3］ Bashar S，Bernadette S A，Walid B，et al．Hypericum triquetrifolium-Derived Factors Downregulate the Production Levels of LPS-Induced Nitric Oxide and Tumor Necrosis Factor-α in THP-1 Cells ［4］李瑋，王秀麗，王青，等．熟地黃水提液對(duì)小鼠單核細(xì)胞分泌TNF-α的影響 ［5］譚立軍，陳新宇，張嵐，等．DMSO和As2O3對(duì)人食管癌細(xì)胞增殖的抑制作用 ［6］ Li Y，JinBo Y， Jia C，et al． Enhancement of human ACAT1 gene expression to promote the macrophagederived foam cell formation by dexamethasone ［7］ Jung-Ae K，Chang-Suk K，Sang Y，et al．Phosphorylated glucosamine inhibits the in?ammatory response in LPS-stimulated PMA-differentiated THP-1 cells 潘華新，王培訓(xùn)，周聯(lián)，等．清熱、活血類(lèi)中藥有效成分對(duì)THP-1巨噬泡沫細(xì)胞形成及分泌IL-1β、TNF-α的影響
同類(lèi)課題研究水平概述
- 1.1冰片抗炎活性的研究現(xiàn)狀 夏忠玉等研究發(fā)現(xiàn)口服冰片能明顯抑制巴豆油引起的小鼠耳腫脹及醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加，明顯延長(zhǎng)熱刺激引起小鼠痛反應(yīng)時(shí)間，減少化學(xué)刺激引起的小鼠扭體次數(shù)。孫曉萍等研究發(fā)現(xiàn)采用冰片治療，抗足跖腫脹作用在30-60min內(nèi)達(dá)到效應(yīng)高峰2-4h中效應(yīng)并不明顯，推測(cè)與冰片抑制炎癥前期的炎癥介質(zhì)有關(guān)，而對(duì)熱板法致痛的鎮(zhèn)痛效應(yīng)較之扭體法作用更為明顯，推測(cè)冰片的鎮(zhèn)痛機(jī)制在于外周鎮(zhèn)痛，可能與抑制炎性介質(zhì)有關(guān)，但并未深入研究。何曉靜等研究發(fā)現(xiàn)冰片可抑制大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)IL-1β及TNF-α等炎癥因子的表達(dá)，推測(cè)冰片對(duì)腦缺血再灌注損傷后急性炎癥反應(yīng)的抑制作用可能是其發(fā)揮腦保護(hù)作用的重要機(jī)制之一。Juhas等亦發(fā)現(xiàn)冰片可使TNBS誘導(dǎo)的ICR小鼠表達(dá)IL-1 β、IL-6 及TNF-α等細(xì)胞因子的mRNA的量明顯減少。 1.2THP-1細(xì)胞炎癥模型及TNF-α測(cè)定方法的研究現(xiàn)狀 目前常用于細(xì)胞抗炎活性藥理實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞有人THP-1細(xì)胞株、小鼠RAW 264.7細(xì)胞株、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞等。考慮到采用人類(lèi)細(xì)胞進(jìn)行疾病研究比動(dòng)物細(xì)胞更好，故許多文獻(xiàn)報(bào)道運(yùn)用THP-1細(xì)胞來(lái)進(jìn)行藥物抗炎活性研究。THP-1細(xì)胞， 經(jīng)PMA誘導(dǎo)后，可分化為巨噬細(xì)胞，以LPS刺激巨噬細(xì)胞可建立細(xì)胞炎癥模型，促進(jìn)其細(xì)胞分泌TNF-α及IL-1。 L929細(xì)胞株檢測(cè)法是檢測(cè)TNF-α的常用方法之一。該法以靶細(xì)胞殺傷作用為原理，具有高敏感性，特異性較免疫學(xué)檢測(cè)法低，可能受其他物質(zhì)的干擾，但通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可盡可能消除干擾，結(jié)果可靠，被廣泛應(yīng)用于國(guó)內(nèi)外免疫及炎癥藥理等實(shí)驗(yàn)中。葛迎春等以LPS刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，并分別以小鼠胸腺細(xì)胞增殖法測(cè)定培養(yǎng)上清液中IL-1的含量，以L929細(xì)胞株檢測(cè)法測(cè)定培養(yǎng)上清液中TNF-α的量，結(jié)果顯示L929細(xì)胞株在TNF-α的測(cè)定中基本不受IL-1的影響。王文良等以L929細(xì)胞株檢測(cè)法及ELISA方法檢測(cè)THP-1細(xì)胞TNF-α的分泌量時(shí)，通過(guò)相關(guān)性比較發(fā)現(xiàn)L929細(xì)胞株檢測(cè)法測(cè)定TNF-α的結(jié)果與ELISA法測(cè)定結(jié)果一致。故可通過(guò)L929細(xì)胞株檢測(cè)法半定量地反映出LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞TNF-α的分泌量。
