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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 一種分離植物或微生物總RNA的試劑組合物及其制備方法
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作B類
- 簡介：
- 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種細(xì)胞總RNA的制備方法，具體涉及一種分離柑橘類植物、煙葉或梨腐爛病菌總RNA的試劑組合物及其制備方法。
- 詳細(xì)介紹：
- 本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)方法樣品選擇性強(qiáng)、操作繁瑣、效率較低等缺點(diǎn)，提供一種分離柑橘類植物、煙葉或梨腐爛病菌總RNA的試劑組合物及其制備方法。本發(fā)明的核心是建立一種快速、高效而又廉價的RNA提取方法。該方法適合分離柑橘類植物、煙葉或梨腐爛病菌總RNA的方法，由于該方法向RNA提取試劑中添加了糖原作為核酸沉淀劑，故與同類型試劑相比，核酸的沉降效率大為提高，對組織樣品中含量很低的核酸成分亦能夠有效分離得到。同時使核酸沉降過程在短時間內(nèi)即可完成，免除了-20℃沉降數(shù)小時的過程，大大縮短了操作時間。該方法適用樣品廣泛，且比商業(yè)化TRIzol試劑更為廉價。樣品勻漿后若不立即進(jìn)行RNA提取可放于-20℃保存至少3天。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設(shè)計、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點(diǎn)、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)
- 本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)方法樣品選擇性強(qiáng)、操作繁瑣、效率較低等缺點(diǎn)，提供一種分離柑橘類植物、煙葉或梨腐爛病菌總RNA的試劑組合物及其制備方法。本發(fā)明的核心是建立一種快速、高效而又廉價的RNA提取方法。該方法適合分離柑橘類植物、煙葉或梨腐爛病菌總RNA的方法，由于該方法向RNA提取試劑中添加了糖原作為核酸沉淀劑，故與同類型試劑相比，核酸的沉降效率大為提高，對組織樣品中含量很低的核酸成分亦能夠有效分離得到。同時使核酸沉降過程在短時間內(nèi)即可完成，免除了-20℃沉降數(shù)小時的過程，大大縮短了操作時間。該方法適用樣品廣泛，且比商業(yè)化TRIzol試劑更為廉價。樣品勻漿后若不立即進(jìn)行RNA提取可放于-20℃保存至少3天。
科學(xué)性、先進(jìn)性
- 與傳統(tǒng)方法相比，此方法無論在操作所需時間，得到的核酸產(chǎn)量和純度上均有明顯優(yōu)勢。由于該方法向RNA提取試劑中添加核算沉淀劑，與同類型實(shí)際相比，核酸的沉降效率大為提高，對組織樣品中含量何地的核酸成分亦能夠有效分離得到。同時使核酸沉降過程在短時間內(nèi)即可完成，免除了-20℃沉降數(shù)小時的過程，大大縮短了操作時間。和商業(yè)化得試劑相比，本方法價格更為低廉，更便于大量樣品的處理。
獲獎情況及鑒定結(jié)果
- 無
作品所處階段
- 中試階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 專利轉(zhuǎn)讓
作品可展示的形式
- 實(shí)物、照片、樣品
使用說明,技術(shù)特點(diǎn)和優(yōu)勢,適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場分析,經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測
- 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)方法領(lǐng)域，為一種分離植物或微生物總RNA的試劑組合物及制備方法。試劑以異硫氰酸胍、苯酚為主要成分，以NaCl、MgCl2等提供陽離子，以醋酸鈉-醋酸緩沖系統(tǒng)穩(wěn)定溶液PH，經(jīng)氯仿簡單抽取后，即可得到高質(zhì)量的RNA。由于本發(fā)明的RNA提取實(shí)際中中添加核算沉淀劑，與同類型實(shí)際相比，核酸的沉降效率大為提高，對組織樣品中含量何地的核酸成分亦能夠有效分離。使核酸沉降過程在短時間內(nèi)即可完成，免除了-20℃沉降數(shù)小時的過程，大大縮短了操作時間。該方法快捷、高效，適用樣品廣泛。
同類課題研究水平概述
- 在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中， RNA分離已成為許多試驗(yàn)不可或缺的技術(shù)手段。分離得到的RNA質(zhì)量的高低也將直接影響后續(xù)試驗(yàn)的進(jìn)行。而RNA由于其自身的生物學(xué)特性，存在易降解、難保存的特點(diǎn)。提取過程中也容易被蛋白質(zhì)、DNA和其他細(xì)胞代謝物污染。因此一種能夠分離得到完整高純度RNA的方法一直是分子生物學(xué)工作者所希望實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)，其對分子生物學(xué)研究亦具有重要意義。 有關(guān)RNA的提取方法很多，依據(jù)RNA分離原理大致可以分為：密度梯度離心，化學(xué)沉降和介質(zhì)吸附三大類。密度梯度離心法對離心設(shè)備要求高，操作繁瑣且處理的樣品非常有限，已經(jīng)基本不再使用；化學(xué)沉降類方法中主要包括：CTAB法、SDS-酚法、異硫氰酸胍-酸酚-氯仿法。其中CTAB法和SDS-酚法在對植物、真菌等樣品的RNA提取中使用較多，其提取原理主要是：利用CTAB、SDS等陰/陽離子去污劑裂解細(xì)胞膜，釋放核酸，同時抑制RNA酶的活性。Tris-HCl、EDTA緩沖體系維持溶液pH值，穩(wěn)定核酸。聚乙烯吡咯烷酮（PVP）則能有效與多酚類物質(zhì)結(jié)合，防止其氧化產(chǎn)物——醌類物質(zhì)對核酸的破壞。隨后經(jīng)乙醇和LiCl兩輪沉降得到RNA 。由于LiCl對RNA的沉降具有一定特異性，絕大部分多糖、次生代謝物等雜質(zhì)便在沉降過程中被除去，從而得到較純的RNA。該方法在處理富含多糖多酚類復(fù)雜樣品時仍然可以得到令人滿意的結(jié)果，然而對于大量樣品的處理，此類方法仍嫌繁瑣，操作時間也較長。并且CTAB法和SDS-酚法均無法用于動物組織總ＲＮＡ的提取。異硫氰酸胍的應(yīng)用使這一狀況得到改觀，由于異硫氰酸胍具有極強(qiáng)的蛋白質(zhì)變性能力，能夠在裂解細(xì)胞的同時使RNA酶迅速失活，從而克服了以上方法裂解能力不足的問題，極大地保證了核酸的完整性。異硫氰酸胍-酸酚-氯仿抽提法就是在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種快速分離ＲＮＡ的方法，首先由Chomczynski及其同事于1987報道，并歷經(jīng)數(shù)次改進(jìn)。該方法適用大多數(shù)動植物樣品，得到的ＲＮＡ完整性好，并可在短時間內(nèi)完成操作，幾乎成為常規(guī)ＲＮＡ提取的標(biāo)準(zhǔn)方法，使用也最為廣泛。商業(yè)化的ＴＲＩｚｏｌ試劑及其分離方法就建立在此基礎(chǔ)之上，它比常規(guī)的異硫氰酸胍-酸酚-氯仿抽提法更為快捷和高效，然而其價格也較為昂貴，不利于常規(guī)大量樣品的處理。
